Método de secuenciación de ADN mediante polimerización

摘要

Método para la determinación de una secuencia de ácido nucleico, comprendiendo dicho método las etapas de: a) desnaturalizar una molécula de ácido nucleico bicatenario correspondiente a dicha secuencia de ácido nucleico, en el que al menos una de las bases de una de las hebras del ácido nucleico bicatenario está unida directa o indirectamente a un soporte, y en el que al menos una de las bases de la otra hebra del ácido nucleico bicatenario está unida a un soporte móvil; b) hibridar una molécula de ácido nucleico monocatenario, "el cebador", con dicha molécula de ácido nucleico bicatenario desnaturalizada; c) aplicar una tensión al cebador hibridado/molécula de ácido nucleico bicatenario obtenido en b); d) incubar el cebador hibridado/molécula de ácido nucleico bicatenario obtenido en la etapa b) con una polimerasa en condiciones que conducirán a por lo menos una pausa en la replicación; y e) determinar la posición de dicha pausa en la replicación con respecto a un extremo del ácido nucleico bicatenario, comprendiendo dicha determinación las etapas de: - medir la distancia (z) entre los dos extremos de la molécula de ácido nucleico bicatenario que están unidos al soporte; - medir la distancia (zhigh) entre los dos extremos de la molécula de ácido nucleico bicatenario que están unidos al soporte, cuando dicha molécula de ácido nucleico bicatenario está desnaturalizada; y - comparar z y zhigh, y - determinar la posición de la pausa, en el que dicha molécula de ácido nucleico bicatenario es una horquilla.