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一种蛋白水解酶，其特征在于：该蛋白水解酶是由冬虫夏草菌(Cordyceps Sinensis)中分离得到的，所述蛋白水解酶的分子量为43kDa，最适温度为30℃，最适pH为9.5，所述蛋白水解酶是经由以下步骤的纯化方法得到的，(1)将冬虫夏草菌粉碎后采用以10倍的质量/体积比加入20mM Tris‑HCl缓冲液浸泡，pH7.4，4℃搅拌24小时；(2)将所述步骤(1)中所得到的浸泡液在18000rpm下离心30分钟；(3)将所述步骤(2)中所得到的离心上清使用HiTrap Q XL离子交换柱进行离子交换层析，先将浸泡液调节为20mM Tris‑HCl pH7.4，并在离子交换层析前再次调节pH到7.4，先用平衡缓冲液20mM Tris‑HCl，pH 7.4洗脱到基线，然后采用梯度洗脱的方法，用含0‑1M NaCl的20mM Tris‑HCl，pH 7.4进行梯度洗脱，收集目的蛋白峰；(4)将步骤(3)中所得到收集液使用Superdex 200 prep grade分子筛层析柱进行分子筛层析，进行分子筛层析的洗脱剂是含500mM NaCl的20mM Tris‑HCl，pH7.4；(5)对步骤(4)所得收集液进行浓缩；(6)对步骤(5)所得收集液进行自然胶电泳，并电洗脱回收蛋白；(7)对步骤(6)所得收集液进行脱盐，冻干；(8)对步骤(7)所得干粉溶解并使用SOURCE 15RPC反相层析柱进行反向层析，收集目的蛋白峰。 |
