一种利用拉氏图信息制备谷氨酸脱羧酶突变体的方法及其突变体

摘要

本发明公开了一种利用拉氏图信息制备谷氨酸脱羧酶突变体的方法及其突变体，该方法包括：构建谷氨酸脱羧酶的三维结构模型，进行二面角合理性评价，生成拉氏图，从拉氏图中确定处于构象不合理区的氨基酸残基位点；针对该位点设计定点突变引物，以谷氨酸脱羧酶基因为模板，进行定点PCR扩增，获得定点突变文库；从所述定点突变文库中筛选谷氨酸脱羧酶突变体。该方法通过拉氏图提供的结构信息对酶进行理性设计，并结合定点突变技术，有效提高突变概率，节省时间，提高实验效率，并筛选得到催化活力优于野生型酶的突变酶，该突变酶可提高催化L-谷氨酸或其钠盐生成γ-氨基丁酸的反应速率，有利于GABA的工业化生产。

主权项

一种谷氨酸脱羧酶突变体的制备方法，其特征在于，包括：(1)构建谷氨酸脱羧酶的三维结构模型，进行二面角合理性评价，生成拉氏图，从拉氏图中确定处于构象不合理区的氨基酸残基位点；(2)针对所述处于构象不合理区的氨基酸残基位点设计定点突变引物，以谷氨酸脱羧酶基因为模板，进行定点PCR扩增，纯化后，转化至宿主细胞，获得定点突变文库；(3)从所述定点突变文库中筛选谷氨酸脱羧酶突变体。