| 主权项 |
一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于包括以下步骤： （1）外植体消毒：取健壮短葶山麦冬当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡5～10min后用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用; （2）启动培养：将经步骤（1）处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～7天后统计污染率和存活率，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2000lx条件下培养30天，统计组培苗的萌动率及生长情况; （3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽;（4）壮苗培养：将经步骤（3）增殖培养的丛生苗切成适当大小，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～12小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至组培苗生长到2cm以上;（5）生根培养：将步骤（2）、（3）或（4）过程获得的高度2.0cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～12小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养1个月后统计生根情况;（6）炼苗移栽：将步骤（5）获得的高约6～8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度 ,待幼苗成活后再移栽大田。 |
