一种抗体标记信号或核酸探针标记信号放大的方法

摘要

本发明公开了一种抗体标记信号或核酸探针标记信号放大的方法，本发明主要方案是将革兰氏阴性细菌的脂多糖与抗体交联，或是将真菌细胞壁的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖与抗体或核酸探针交联，然后采用鲎试剂与抗体交联的革兰氏阴性细菌脂多糖或真菌细胞壁（1,3）-β-D-葡聚糖发生特异性反应，提高抗体或核酸探针检测的灵敏度。本发明的信号放大系统，可检测到低于pg级含量的目标底物。

主权项

一种抗体标记信号放大的方法，其特征在于：所述的抗体标记信号放大方法是采用能与鲎试剂发生特异性反应的革兰氏阴性细菌的脂多糖或真菌细胞壁的真菌（1,3）‑β‑D‑葡聚糖通过化学键与抗体进行联接，作为抗体检测过程的检测放大信号，具体步骤如下：（1）脂多糖或（1,3）‑β‑D‑葡聚糖溶液的制备：称取脂多糖或葡聚糖 0.01g，溶于1 mL 0.1mol/L 的Na₂CO₃ 溶液中溶解，然后加入1 mL 新配置的0.1mol/L 的NaIO₄ 溶液，55℃水浴反应60‑120 分钟后，加入40 微升异丙醇，放入4℃冰箱30 分钟，12000rpm/min 离心10 分钟，弃上清液，沉淀用1 mL 纯净水洗涤2 次，每次5 秒钟，后加入1 mL 0.1mol/L 的Na₂CO₃ 溶液溶解，制备脂多糖或葡聚糖溶液；（2）抗体溶液的制备：取待标记抗体0.01g，用0.5 mL 0.1mol/L 的Na₂CO₃ 溶液充分溶解，即可制得抗体溶液；（3）脂多糖或（1,3）‑β‑D‑葡聚糖‑抗体交联物的制备：将脂多糖或葡聚糖溶液与抗体溶液按1 比1 体积比例混合，在37℃摇床上，100‑200rpm/min 下避光反应30‑60 分钟，制备脂多糖或葡聚糖‑ 抗体交联物；反应完成后，加入0.1 g 甘氨酸，封闭反应15‑30 分钟；将所有溶液装入截留分子量为1 万的透析袋中，用1 L 1 mmol/L pH 7.0 的磷酸盐缓冲液避光透析过夜；取出透析袋中溶液，放入试剂瓶中，4℃冰箱保存。