一种制备高纯度L-辛弗林的方法

摘要

一种制备高纯度L-辛弗林的方法，涉及采用超滤、树脂吸附和反渗透技术分离纯化L-辛弗林的方法。本发明以市售枳实为原料，经溶解及抽滤、超滤除糖和蛋白质、大孔吸附树脂脱色、乙醇除寡糖、反渗透膜浓缩、冷冻干燥，制得L-辛弗林粉末。本发明采用在常温下实施对L-辛弗林高效分离纯化，操作简单，产品纯度高，溶剂可循环使用，成本低，无“三废”排放等特点。采用本发明方法制备出的高纯度L-辛弗林产品可广泛应用于医药、保健品、食品、饮料等行业。

主权项

一种制备L‑辛弗林的方法，其特征在于具体方法步骤如下：(1)制备L‑辛弗林原料液以市售枳实为原料，用粉碎机粉碎后过20目的筛网，未过筛网的颗粒进行下一批次的粉碎，过筛网的粉末进行提取L‑辛弗林操作，按枳实粉末质量：0.05～0.1mol/L盐酸溶液体积之比为1kg∶8～10L的比例，将枳实粉末分散在0.05～0.1mol/L的盐酸水溶液中，先浸泡1～2h后，再搅拌3～5h，进行第一次提取，接着将提取物在6000～8000r/min的条件下进行第一次离心分离10～20min，分别收集第一次离心分离上清液和沉淀；对收集的第一次离心分离沉淀，按枳实粉末质量：0.05～0.1mol/L盐酸溶液体积之比为1kg∶4～6L的比例，先将第一次离心沉淀分散于0.05～0.1mol/L盐酸水溶液中，再搅拌3～5h，进行第二次提取，接着将第二次提取物在6000～8000r/min的条件下进行第二次离心分离10～20min，分别收集第二次离心分离的上清液和沉淀，对收集的第二次离心分离沉淀，用于进一步提取橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷；对收集的第二次离心分离上清液，与第一次离心分离上清液合并，即为L‑辛弗林原料液，用于下步制备L‑辛弗林脱糖液；(2)制备L‑辛弗林脱糖液在第(1)步完成之后，先将第(1)步收集的L‑辛弗林原料液泵入超滤器中，用截留分子量为3000～10000Da的超滤膜，在0.05～0.2MPa的压力下进行超滤分离，分别收集滤过液和截留液，对收集的截留液，主要含有大分子糖类和蛋白质，用作发酵食用菌的添加剂；对于收集的滤过液，即为L‑辛弗林脱糖液，用于下步制备L‑辛弗林脱色液；(3)制备L‑辛弗林脱色液取已活化的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂湿法装柱，按照大孔吸附树脂体积：第(2)步制备出的L‑辛弗林脱糖液体积的比为1L∶5～15L的比例，将第(2)步制备出的L‑辛弗林脱糖液泵入装有D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂的层析柱中，控制L‑辛弗林脱糖液泵入流速为D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂体积的1～5倍/小时，进行脱色处理，处理完成后分别收集吸附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱和流出的柱后液；对收集的吸附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，先用3～5倍树脂体积的蒸馏水冲洗，分别收集水洗液和洗涤后的吸附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱；对收集的水洗液，与流出的柱后液合并，即为L‑辛弗林脱色液；对收集的水洗后的吸附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，用pH为9.5～10.5、乙醇浓度为30％～60％的水溶液洗脱，洗脱液流速为1～5倍树脂体积/小时，分别收集洗脱液和脱附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，对收集的洗脱液，含大量黄色素，用于减压浓缩回收乙醇并制备黄色素；对收集的脱附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，用3～5倍树脂体积的蒸馏水冲洗，分别收集水洗液和水洗后的脱附色素的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，对收集的水洗液，泵入水处理池进行生化处理，达标后排放；对收集的水洗后脱附色素的的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂柱，可用于下批次吸附色素处理；(4)制备L‑辛弗林脱寡糖液在第(3)步完成之后，按第(3)步制备出的L‑辛弗林脱色液体积：95％乙醇体积比为1L∶1～3L的比例，向脱色液中加入95％乙醇，搅拌10～30min后静置2～4h，过滤并收集滤液和滤渣，对收集的滤渣，用于制备高纯度寡糖；对收集的滤液，在40～55℃、真空度为‑0.06MPa～‑0.09MPa的条件下，进行真空减压浓缩，分别收集真空减压浓缩液和冷凝液，对收集的冷凝液，主要含乙醇，调配成乙醇浓度为30％～60％的洗脱水溶液，用于下批次洗脱黄色素；对收集的浓缩液，即为L‑辛弗林脱寡糖液；(5)制备L‑辛弗林反渗透浓缩液第(4)步完成后，先将第(4)步收集的L‑辛弗林脱寡糖液泵入反渗透器中，在0.2～0.6MPa的压力下进行反渗透浓缩，分别收集反渗透滤过液及截留液，对收集的滤过液，调节酸度后用于从下一批次的枳实粉中提取L‑辛弗林；对收集的截留液，即L‑辛弗林反渗透浓缩液；(6)制备L‑辛弗林冻干粉第(5)步完成之后，先将第(5)步制备的L‑辛弗林反渗透浓缩液在‑10～‑30℃下，预冻3～5小时，再置于冷冻干燥机中，在真空度为20～60Pa、温度为‑40～‑60℃的条件下，冷冻干燥24～30小时，就制备出L‑辛弗林冻干粉；(6)树脂的再生将用了10～15次后的D3520、或X‑5、或NKA‑12、或NKA‑9大孔吸附树脂，用蒸馏水冲洗至流出液清澈不浑浊；再依次用2～3倍树脂体积的95％乙醇、蒸馏水、5％HCl、蒸馏水、5％NaOH浸泡搅拌2h，最后用蒸馏水洗至中性，备用。