流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用

摘要

流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用，涉及中药有效成分提取分离及应用技术，包括以下步骤：乙醇溶液提取：大孔吸附树脂柱色谱分离：硅胶柱色谱分离：凝胶柱色谱分离：半制备高效液相色谱纯化：高效液相色谱检测：最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，精确测定了流苏花中总黄酮类化合物的具体组成及含量，并系统研究了其抗氧化的效果。本发明所使用的方法提取纯度高，易于工业化，提取得到的总黄酮类化合物具有优异的抗氧化活性。

主权项

一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）乙醇溶液提取：将流苏花药材干燥、粉碎，加入质量浓度为60‑80％乙醇浸泡8‑12小时后，加热回流提取3‑5小时，过滤得到滤液和残渣，再将残渣以质量浓度为60‑80％乙醇加热回流提取2次，每次3‑5小时，合并滤液，将滤液减压蒸发浓缩得浸膏，第1次加热回流时，乙醇的添加量为流苏花药材质量的10‑12倍，第2次和第3次加热回流时，乙醇的添加量是流苏花药材质量的8‑10倍；（2）大孔吸附树脂柱色谱分离：将得到的浸膏用质量浓度为10‑30%乙醇溶解，过滤，将滤液用D101或AB‑8型大孔吸附树脂进行充分吸附，装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇‑水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为50‑60%乙醇‑水洗脱馏分，减压浓缩至浸膏状物，将浸膏在50‑60℃下真空减压干燥，即得流苏花总黄酮类化合物粗品； （3）硅胶柱色谱分离：将流苏花总黄酮类化合物粗品采用硅胶柱色谱上样分离，依次以CHCl₃:CH₃OH体积比为1: 9，1: 7，1: 5，1: 3为流动相梯度洗脱，采用芦丁作为对照，用紫外光谱测定流苏花总黄酮类化合物的含量，收集含有流苏花总黄酮类化合物大于60%的馏分段；（4）凝胶柱色谱分离：将硅胶柱色谱分离后的样品采用凝胶柱色谱分离，采用CHCl₃:CH₃OH体积比为2: 1等度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥；（5）半制备高效液相色谱纯化：将凝胶柱色谱分离后的样品采用半制备高效液相色谱纯化，收集洗出液，减压浓缩，干燥得流苏花总黄酮类化合物，色谱条件为色谱柱ODS‑A，20×250mm，流动相为CH₃OH:H₂O，体积比为7:3；（6）高效液相色谱检测：最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，色谱条件为：色谱仪：Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱：Agilent Zorbax SB C₁₈色谱柱，4.6×250 mm，5 μm，流动相：甲醇‑乙腈‑0.4%冰醋酸，体积比为30: 10: 60，流速：1.0 mL/min，柱温：25℃，检测波长：350 nm；采用上述方法制备的流苏花总黄酮类化合物，由槲皮素‑3‑甲氧基‑7‑O‑α‑L‑阿拉伯(1‑6)‑β‑D‑葡萄糖苷、北美圣草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、杨梅素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、木犀草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷和山奈酚‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷组成，质量百分含量分别为5‑8%、8‑12%、3‑6%、30‑50%和20‑30%，上述总的质量百分含量为100%。