从脐带中分离培养间充质干细胞的高效方法

摘要

本发明涉及一种从脐带分离培养间充质干细胞的方法，即阶段性植块悬液培养法，其包括以下的步骤：（1）将离体的脐带用组织消化酶进行消化；（2）将消化后得到的细胞用间充质干细胞培养基进行培养，得到间充质干细胞；（3）将消化后得到的未完全消化的组织用间充质干细胞培养基培养，得到间充质干细胞。根据本发明方法获得的间充质干细胞，其在表面标志、生长特点和多向诱导分化等方面均符合间充质干细胞的特性，且方法简便快捷，能同时获得大量间充质干细胞，为间充质干细胞的获得提供了新的途径。

主权项

一种分离培养间充质干细胞的方法，其包括以下的步骤(1)～(3)：(1)取离体的脐带用组织消化酶进行消化处理；其中所述的组织消化酶为胶原酶和透明质酸酶，所述的胶原酶为Ⅱ型胶原酶，所述胶原酶的工作浓度为0.05‑0.2％重量体积，所述透明质酸酶的工作浓度为0.0005‑0.001％重量体积；其中所述消化处理的条件为37℃，1‑3h；(2)在步骤(1)的消化处理结束后，取细胞悬液置于间充质干细胞培养基中培养，得到间充质干细胞，所述的间充质干细胞培养基为无血清培养基；在培养过程中，将换液时所换下的细胞悬液重置于新培养瓶中继续培养，得到间充质干细胞；其中所述的将细胞悬液置于间充质干细胞培养基中培养，是指待细胞贴壁生长后，培养至80‑90％细胞融合；(3)在步骤(1)的消化处理结束后，取未完全消化的脐带组织置于间充质干细胞培养基中培养，即可得到间充质干细胞，所述的间充质干细胞培养基为无血清培养基；其中所述的取未完全消化的脐带组织置于间充质干细胞培养基中培养，是指待组织块周围有梭形细胞爬出后，培养至80‑90％细胞融合。