一种海洋微藻的串联培养和快速收集方法

摘要

本发明公开了一种海洋微藻的串联培养和快速收集方法，属水产养殖领域。过去海洋微藻常采用光生物反应器或开放水泥池培养，基建投资大，工艺繁杂，技术要求高，易污染，操作麻烦，效率低下。本发明技术特点是：采用两种微藻混合养殖，优势互补，相互促进，减少了资源浪费；采用三角烧瓶串联养殖，通入的气体得到三次利用，节约了能量和资源且不易污染；在培养的早、中、晚期提供不同光照和温度，促进了微藻快速生长和高不饱和脂肪酸大量积累；加入复合沉淀剂后，将藻液置于5℃低温且黑暗环境，收集效率高，营养不散失，操作简单，实用性强。

主权项

一种海洋微藻的串联培养及快速收集方法，其特征在于具体方法如下：步骤1 培养液的制备培养液成分配方：NaHCO₃ 1份，NH₄NO₃ 0.2份，尿素0.1份，人尿0.5份，Na₂SiO₃ 0.005份，f/2微量元素溶液1份，f/2维生素溶液1份，磷酸钙0.2份，牛粪浸出液1份，土壤浸出液0.8份，海泥抽取液0.5份，NiSiO₄·6H₂O 0.02份，NH₄VO₃ 0.001份，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.05份，Na₂WO₂·2H₂O 0.03份，煮沸冷却海水1000份；装入棕色磨口塞试剂瓶中，密封，放在摇床上摇匀15分钟，置入4℃冰箱保存，备用；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)：ZnSO₄·4H₂O 23毫克，MnCl₂·4H₂O 178毫克，CuSO₄·5H₂O 10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O 3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O 7.3毫克，CoCl₂·6H₂O 12毫克，Na₂EDTA 4.35克，纯水1000毫升；f/2维生素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)：维生素B₁₂ 0.5毫克，维生素B₁ 100毫克，维生素H 0.5毫克，纯水1000毫升；步骤2 接种培养取三个5000毫升洁净三角烧瓶，加入步骤1所述培养液2500毫升，选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的亚心形扁藻和球等鞭金藻藻种分别接种，接种密度亚心形扁藻2.5万个细胞/毫升藻液，球等鞭金藻8万个细胞/毫升藻液，轻轻摇匀3分钟；用橡皮塞塞住瓶口，塞子上打上2个孔，孔的直径为9毫米，插入两根玻璃管，管的直径为8毫米，一根为充气管，另一根为排气管，第2个瓶的充气管与第一个瓶的排气管相连，第3个瓶的充气管与第2个瓶的排气管相连，这样充入的气体经过三个瓶子，可以得到3次利用；第一个桶的充气管上端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，充入混合气体，气体成分＝空气98％+纯CO₂ 1.5％+一氧化氮0.3％+硫化氢0.2％，每天24小时不间断充气，气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；将这3个三角烧瓶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，连续培养9天，前3天调节温度至22℃，光照强度4500lux，光暗周期＝6h/L+6h/D，即提供间歇光，6小时连续光照，6小时连续黑暗，如此循环；第4‑6天，调节温度至24℃，光照强度6000lux，每天提供15小时连续光照，然后9小时连续黑暗，如此循环，至第7天，调节温度至26℃，光照强度8000lux，每天24小时连续光照，没有黑暗，每个瓶子补加蒸馏水500毫升；到第9天，亚心形扁藻细胞密度可达600万/毫升藻液，球等鞭金藻藻细胞密度可达到1800万/毫升藻液，即可收集藻细胞；步骤3 所述的藻细胞进行收集按重量份配比计取硫酸亚铁，甲壳素，氯化铝各1000g，分别用粉碎机粉碎至面粉状(粒径大小以通过200目筛)，按重量比硫酸亚铁1份，甲壳素3份，氯化铝2份的比例混合，用搅拌机充分搅拌、混合均匀，制成复合沉淀剂，取培养了9天的藻液1000份，加入所述复合沉淀剂0.4份，用空气压缩机连接一塑料管插入藻液充气搅拌、混合15分钟，将藻液置于5℃冷柜中(保持黑暗)静置、沉淀24小时，由于沉淀剂的沉淀和温度的突然降低，藻细胞迅速休克且下沉到瓶底，弃上清液，取底部粘稠牙膏状藻泥，藻细胞收集完毕。