一种茶树内生草螺菌扦插繁殖促生剂的制备与应用方法

摘要

本发明提出了一种茶树内生草螺菌扦插繁殖促生剂的制备与应用方法。它利用茶树内生草螺菌的生物学特点，用其发酵制备茶树内生草螺菌培养液，并按一定配比稀释后浸泡处理茶树扦插条。促生剂内细菌分泌的植物激素诱导扦插条形成不定根；促生剂内的细菌进入扦插条内共生并继续分泌代谢物，促进茶苗的快速生长。处理扦插后扦插条根系发达，成苗率高，茶苗生长旺盛，叶片深绿。本发明的技术方法成本低、操作简单、绿色安全、功效多、作用持久。该促生剂既可用于经济作物茶树的扦插繁殖也可用其它山茶属植物的扦插繁殖。

主权项

一种茶树内生草螺菌扦插繁殖促生剂的制备，其特征在于其步骤为：1）、茶树内生草螺菌的筛选用清水冲洗干净无病害山茶树样本，再用75%酒精消毒0.5小时，随后用百分比浓度1%的汞溶液消毒3分钟；最后用无菌水冲洗3‑5次，吸取最后一次冲洗材料的无菌水100μl，涂布牛肉膏蛋白胨培养基平板上，37℃培养3天无菌落出现后，再将消毒处理的茶树叶片及组织切去边缘部分，将内部组织切小块放置于牛肉膏蛋白胨培养平板中，28‑37℃培养48 小时后获得内生菌菌落；随后进行菌落纯化与细菌分类学鉴定,最后获得茶树内生草螺菌并‑80℃保存；所述牛肉膏蛋白胨培养基为3g牛肉膏、10g蛋白胨、5g NaCl、1.5%琼脂，加水至1000ml；2）、茶树内生草螺菌的培养及促生剂的制备取‑80 °C保存的茶树内生草螺菌菌种，接种5mL LB液体培养基，每分钟150转摇动，37 °C培养过夜；将活化后的菌液以1:100比例接入新鲜的LB液体培养基或KB液体培养基中放大培养，培养条件为摇床转速每分钟200转，温度为 37 °C；待细菌培养8‑10小时、OD₆₀₀值为1.2‑1.5时收集全部的细菌培养液，加入1%甘油后，存放于4 °C备用或直接使用，上述细菌培养液即为本发明茶树内生草螺菌扦插繁殖促生剂;所述LB液体培养基为10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g NaCl，加水至1000ml，10μg/mL壮观霉素；所述KB液体培养基为20 g胰蛋白胨1.5 g K₂HPO₄、15 ml甘油、1M MgSO₄，加水至1000 ml，10μg/mL壮观霉素。