吸附固定透性化乳酸菌转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法

摘要

一种吸附固定透性化乳酸菌转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法，包括如下步骤：（1）吸附固定载体的预处理；（2）制备透性化乳酸菌；（3）吸附固定透性化乳酸菌；（4）菜油脚料的乳化、酶解处理；（5）吸附固定透性化乳酸菌转化菜油脚料乳化、酶解液。本发明可实现农产品废弃物菜油脚料和废弃陶瓷的资源化利用，具有原料成本低，转化细胞密度高，转化率可达40％-60％，较游离的透性化乳酸菌转化高20%左右，转化过程不易染菌，干扰物质少，产物易分离，菌体可以重复利用等优点。

主权项

一种吸附固定透性化乳酸菌转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法，其特征是包括以下步骤：（1）吸附固定载体的预处理：将废弃陶瓷敲碎，得到直径为4‑6 mm的多孔陶瓷颗粒，清水冲洗后，先用0.1 mol/L HCl溶液浸泡24‑48 h，再用0.1 mol/L NaOH溶液浸泡24‑48 h，最后用水洗至中性，烘干，灭菌，得到无菌吸附固定多孔陶瓷载体；（2）制备透性化乳酸菌：从新鲜斜面培养基上挑取1‑3环乳酸菌，接种到50‑200 mL MRS培养基中，35‑37℃厌氧培养20‑26 h，即为乳酸菌菌悬液，取菌悬液继续在MRS培养基中扩大培养；将菌悬液4℃离心收集菌体细胞，将菌体细胞置于‑20℃下冷冻后取出，在室温下融化，反复冻融2‑4次，即得透性化乳酸菌；（3）吸附固定透性化乳酸菌：将步骤（2）的透性化乳酸菌加入含步骤（1）的无菌吸附固定多孔陶瓷载体的反应管中，然后加入无菌生理盐水浸没载体，再加入0.02%‑0.05%的硫酸铝钾和0.3％‑0.6％的淀粉，透性化乳酸菌细胞浓度达到0.3‑0.6 g/mL，4℃条件下吸附固定30‑120 min后，4℃离心去上清，即得吸附固定透性化乳酸菌；（4）菜油脚料的乳化、酶解处理：将菜油脚料、Tween 80 、Span‑80按照1:（0.4‑0.9）: （0.2‑0.6）比例混合，45‑80℃水浴5‑15min，再加入适量去离子水至菜油脚料终浓度为80‑100 mg/mL，用混合器混合均匀，110‑121℃灭菌20‑30 min，即为菜油脚料乳化液；取菜油脚料乳化液，加入pH值8.0的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液，添加爪哇毛霉脂肪酶粉至终浓度为200‑350 U/mL，40‑60℃，120‑150 rpm酶解30‑50 min，即得菜油脚料的乳化、酶解液；（5）吸附固定透性化乳酸菌转化菜油脚料乳化、酶解液：将步骤（4）的菜油脚料的乳化、酶解液和pH为6.0‑6.8的0.1 mol/L柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液加入步骤（3）的含吸附固定透性化乳酸菌的反应管，使得菜油脚料终浓度为60‑80 mg/mL，35‑38℃转化19‑22 h，离心分离后，上清液为转化液，用正己烷将转化液中的共轭亚油酸萃取。