一种测定花生籽仁内源激素的方法

摘要

本发明提供了一种测定花生籽仁內源激素的方法，包括以下步骤：花生籽仁用液氮研磨成粉后用甲醇进行两次浸提；用三氯甲烷萃取三次，然后向水相中加入交联聚乙烯吡咯烷酮振荡去除酚类，离心；用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯萃取三次，合并上层酯相用氮气吹干，得到残留物一；下层水相调节至碱性，用水饱和正丁醇萃取三次，合并上层油相后用氮气吹干，得到残留物二；残留物一和残留物二分别用甲醇水混合液溶解，用高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱采用梯度脱洗使内源激素得到良好的分离，避免了色谱图出现峰图重叠、过度密集、拖尾等问题，将四种激素在不同PH条件下提取，使各种激素都能得到最大程度的提取。

主权项

一种测定花生籽仁內源激素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)花生籽仁用液氮研磨成粉，称取1.0g置于离心管中，加入4‑6mL体积分数为80％的预冷甲醇，摇匀，在0‑4℃避光浸提12‑24h，得到浸提样品；(2)将步骤(1)得到的浸提样品在0‑4℃以3000‑4000r/min的转速离心20min，收集第一上清液，得到残渣；(3)将步骤(2)得到的残渣再次使用4‑6mL体积分数为80％的预冷甲醇浸提，并在0℃冰水混合物中振荡2‑4小时，然后在0‑4℃以3500‑4500r/min的转速离心15min，得到第二上清液，合并步骤(2)得到的第一上清液和所述第二上清液，得到上清液；(4)将步骤(3)得到的上清液在30‑38℃下旋转减压蒸发，去除上清液中的甲醇，得到浓缩液；(5)将步骤(4)得到的浓缩液用等体积的三氯甲烷萃取三次，留取上层水相，然后向水相中加入交联聚乙烯吡咯烷酮振荡5‑10min去除酚类，再以4500‑5000r/min的转速离心5min，得到第三上清液；(6)将步骤(5)得到的第三上清液用1mol/L的盐酸调节至酸性，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并上层酯相用氮吹仪吹干，得到残留物一；下层水相用0.5mol/L NaOH调节至碱性，用等体积的体积分数为80％的水饱和正丁醇萃取三次，合并上层酯相后用氮吹仪吹干，得到残留物二；(7)将步骤(6)得到的残留物一和残留物分别用0.8‑1.2ml甲醇水混合液溶解，甲醇与水的体积比为45:55，过微孔滤膜后用高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱采用梯度脱洗。