一种低数量级诱变细胞的高通量分析系统与计数方法

摘要

本发明公开了一种低数量级诱变细胞的高通量分析系统与计数方法。系统包括PC机/笔记本电脑、用于维持细胞生长环境的细胞培养箱、高通量的96x微电极板、正常细胞、诱变细胞和诱变剂。首先利用PC机/笔记本电脑中的实时细胞监控软件记录诱变细胞的生长曲线，并分析该诱变细胞响应曲线的动态特征，计算得到诱变细胞响应曲线的基准值和阈值，在此基础上，建立诱变细胞数目与生长时间之间的关系方程（亦即：估计模型），再利用非线性回归算法，辨识得到该估计模型的参数，利用辨识的估计模型实现对低数量级、待测诱变细胞数目的计数。本发明最大的优势在于，采用非侵入式的检测手段，无需生物标记，且可以实现高通量的检测。

主权项

一种低数量级诱变细胞的高通量分析系统的计数方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将正常细胞接种在96x的微电极板的微孔中；(2)等待正常细胞稳定12小时后，在微电极板的不同的微孔中加入不同数量的诱变细胞与诱变剂；(3)诱变剂杀死正常细胞后，剩下的诱变细胞继续生长，实时细胞监控软件平台控制并记录整个诱变过程，记录并存储不同诱变细胞的生长曲线；(4)对所记录的诱变细胞生长曲线进行平滑处理，去除传感器的噪声信号；(5)分析诱变细胞响应曲线的动态特征，计算不同数量级诱变细胞生长曲线的基准值与阈值；(6)取所有生长曲线基准值的最大值为最终基准值，取所有生长曲线阈值的最小值为最终阈值；最终基准值与最终阈值分别所在的水平直线与每一条诱变细胞的生长曲线有两个交点，取交点之间的时间差值为诱变细胞的生长时间；(7)建立诱变细胞数目与生长时间之间的幂函数方程，即估计模型，并用非线性回归算法得到该估计模型的参数；所述估计模型为：其中a₁,a₂,a₃为估计模型参数，M_j为诱变细胞数目，t_j为诱变细胞的生长时间；j代表不同数量诱变细胞的序号，其取值范围为j＝1,2,3,4,5,6,7,8,9,10；(8)利用估计模型估算待测诱变细胞样品的细胞数目。