猪血白细胞抗菌肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪血白细胞抗菌肽的制备方法，它包括以下具体步骤：（1）猪血采集；（2）收集白细胞；（3）萃取；（4）脱酸；（5）抗菌肽的纯化。本发明方法实现了从猪血白细胞提取具有较强抗菌活性的多肽物质，为生产抗菌肽提供了一个新的途径和方法。本发明方法具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，适用于较大量的从猪血中分离纯化抗菌肽。

主权项

一种猪血白细胞抗菌肽的制备方法，其特征在于：它包括以下具体步骤：（1）猪血采集：从屠宰场采集新鲜猪血加入10%的抗凝剂，充分混匀后用200目滤布过滤，除去纤维和血凝块及其他杂质；（2）收集白细胞：将收集的抗凝猪血在4℃下高速离心，弃去大部分的上层黄色澄清血浆和底层红细胞，收集中间层即白细胞与血小板和部分血浆与红细胞沉淀；沉淀物中加入3倍体积氯化铵溶液裂解红细胞，4℃下高速离心，弃去上清液，收集沉淀即为白细胞；（3）萃取：将白细胞中加入10％的醋酸，用料理机进行搅打破碎，染色镜检白细胞是否破碎，若未破碎，重复进行均质破碎，至镜检无完整细胞；4℃超高速离心，收集上清液即为中性粒细胞胞浆内的颗粒组份；4℃下搅拌过夜，萃取得醋酸提取物；（4）脱酸：将以上方法萃取得到的醋酸提取物，经4℃下高速离心，收集上清液，旋转蒸发除去醋酸和部分水分后，真空冷冻干燥得抗菌肽粗品，密封包装后在‑20℃保存；（5）抗菌肽的纯化：将冻干抗菌肽粗品用0.5%甲醇溶解,再上样于层析柱，同时打开柱的下端出口，收集特征峰洗脱液再真空冷冻干燥得抗菌肽，‑20℃保存。