| 摘要 |
Способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину Е, включающий в себя взаимодействие базофилов с антителами и иммуноглобулином Е человека, отмывание клеток от излишков иммуноглобулина и анализ физико-химических параметров полученной смеси и определение значимого параметра, отличающийся тем, что предварительно готовят не менее трех смесей антител с иммуноглобулином Е человека, которые потом инкубируют с гепаринизированной кровью донора при 37±1°C, а после отмывки излишков иммуноглобулина добавляют поликлональные антитела козы к иммуноглобулину Е человека и вновь инкубируют при 37±1°C в течении 30-40 мин, после чего реакцию прекращают введением этилендиаминотетраацетата, добавляют меченые разными флуоресцентными метками антитела к CD63,CD123 и HLA-DR, выдерживают при комнатной температуре в темноте в течение 30-35 мин, затем лизируют эритроциты, отмывают смесь центрифугированием и анализируют в проточном цитофлуориметре с последующим подсчетом процента активированных клеток с фенотипом CD63из пула клеток с фенотипом CD123HLA-DR, используя в качестве положительного контроля используют формил-метионин-лейцин-фенилаланин, а в качестве отрицательного контроля показатель клеток, инкубированных в отсутствие иммуноглобулина Е, а также показатель клеток, инкубированных с иммуноглобулином Е, предварительно связанным с избытком нейтрализующих антител к иммуноглобулину Е, и констатируют в случае, если в опытных образцах при увеличении дозы исследуемых антител не отмечается дозозависимых изменений процента активированных базофилов, соответствующие антитела признаются не нейтрализующими, в случае об� |
