一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强葡萄糖氧化酶分泌的方法

摘要

本发明公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC NO：M 2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

主权项

一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，其特征在于，是将毕赤酵母UPR关键基因Hac1p连接到毕赤酵母表达载体pPICZα上，将其下游靶基因连接到表达载体pPIC3.5K上，并将下游靶基因表达质粒与Hac1p表达质粒一起转化入Pichia pastoris GS115‑pPIC9K‑GOD中得到的基因工程菌；所述下游靶基因为Pdi1或Kar2，来源于为毕赤酵母GS115；或者所述下游靶基因为Ero1、Lhs1或Sil1中任一一个，来源于Saccharomyces cerevisiae S288c。