糖基化的麦芽糖结合蛋白及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种糖基化的麦芽糖结合蛋白及其制备方法与应用，一种麦芽糖结合蛋白表达基因malE-Mut，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。此糖-蛋白缀合物疫苗作为TD抗原不仅能在健康成年人体内产生持久的免疫力，而且针对上述高危人群同样有效。

主权项

一种麦芽糖结合蛋白表达基因malE‑Mut的制备方法，其特征在于，麦芽糖结合蛋白表达基因malE‑Mut的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，包括如下步骤：（1）设计一对嵌合引物，其序列分别为：malE‑178‑1：5’TGTTGCGTTCTGGTC，malE‑178‑2：5’GACCAGAACGCAACA；设计一对模板基因的最远端上下游引物，分别为：k‑waaL‑F：CTCGAGAAAAAAAACTGGATAGCGTACTGGAACAGAGCTGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC和k‑waaL‑R：TTACTTGTTTTTCATCGCTAATAATAAGCCGGCGTAAACATGGGAATTAGCCATGGTCC然后以malE‑178‑1和k‑waaL‑F为引物，以malE基因为模板，合成PCR片段k‑waaL‑F‑ malE‑178‑1；然后以malE‑178‑2和k‑waaL‑R为模板，合成片段malE‑178‑2‑ k‑waaL‑R；以PCR片段k‑waaL‑F‑ malE‑178‑1和malE‑178‑2‑ k‑waaL‑R混合物作共同模板，以k‑waaL‑F和k‑waaL‑R为引物，合成PCR产物，制得在N178位插入五肽糖基化序列位点的malE突变基因；（2）设计一对嵌合引物，其序列分别为：malE‑341‑1：TGTTGCGTTCTGGTCACGCGGATCTTTCACCAACTC和malE‑341‑2：GACCAGAACGCAACAATTGCCGCCACTATGGAAAAC设计一对模板基因的最远端上下游引物，分别为：t‑waaL‑F：GTATGTCTCTTGCAGATTTG和t‑waaL‑R：ATGGCGTAACTCAAAGATTC然后以malE‑341‑1和t‑waaL‑F为引物，以步骤（1）制得的在N178位插入五肽糖基化序列位点的malE突变基因为模板，合成PCR片段t‑waaL‑F‑ malE‑341‑1；然后以malE‑341‑2和t‑waaL‑R为模板，合成片段malE‑341‑2‑ t‑waaL‑R；以PCR片段t‑waaL‑F‑ malE‑341‑1和malE‑341‑2‑ t‑waaL‑R混合物作共同模板，t‑waaL‑F和t‑waaL‑R为引物，合成PCR产物，制得在N178位和N341位都插入五肽糖基化序列位点的malE突变基因。