一种建立富含蜕皮激素的多花筋骨草悬浮细胞系的方法

摘要

本发明公开了一种建立富含蜕皮激素的多花筋骨草悬浮细胞系的方法，包括如下步骤：1、将多花筋骨草外植体置于诱导培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织一；2、将所述愈伤组织一置于继代培养基上进行继代培养5次以上，获得愈伤组织二；3、将所述愈伤组织二置于悬浮培养基中进行悬浮震荡培养；4、收获细胞，提取蜕皮激素。利用本发明所提供的方法首次建立了多花筋骨草悬浮细胞系，从而快速高效获得具有亲本全套基因的单倍体植株。这不仅有利于从细胞学角度深入解析多花筋骨草合成蜕皮激素机理，也为多花筋骨草的基因转化和遗传修饰奠定了技术基础。

主权项

一种建立富含蜕皮激素的多花筋骨草悬浮细胞系的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(一)、将多花筋骨草外植体置于诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织一；步骤(二)、将所述愈伤组织一置于继代培养基上进行继代培养五次以上，选取生长均一、质地疏松的，从而得到愈伤组织二；步骤(三)、将所述愈伤组织二置于悬浮培养基中进行悬浮震荡培养；步骤(四)、收获细胞，提取蜕皮激素；所述悬浮培养基配方如下：MS基本培养基中添加最终浓度为0.6mg/L 2，4‑D和20g/L蔗糖，调节pH＝5.8；于121℃高压灭菌20分钟；所述诱导培养基和继代培养基配方如下：MS基本培养基中添加最终浓度为0.4mg/L 2，4‑D、0.2mg/L KT、0.2mg/L 6‑BA和5‑6g/L琼脂；调节pH＝6.2；于121℃高压灭菌20分钟；外界调控条件为：温度＝25±1℃；光暗周期16小时/8小时；光照强度2000lx；采用透气膜封口。