一种人第VIII凝血因子的制备方法

摘要

本发明公开了一种人第VIII凝血因子的制备方法，包括如下步骤：（1）从人血浆中分离冷沉淀，加入Tris-HCl溶解液溶解；（2）一次PEG沉淀：向溶解液中加入PEG1溶液，搅拌静置后离心；（3）收集离心后的上清液，加入S/D溶液灭活；（4）二次PEG沉淀：将灭活后的所述上清液澄清过滤，滤液转至低温反应罐，在搅拌条件下加入PEG2溶液，搅拌静置后离心；（5）沉淀洗涤、采用溶解液溶解，溶解完全后离心，收集上清，过滤，配制、除菌分装，冻干、轧盖，干热灭活得到产品。本发明所述方法采用二次PEG沉淀法简化了生产工艺，降低了对大型设备的要求，占地面积小，操作简单，成本低廉，提高了劳动效率，提高了经济效益。

主权项

一种人第VIII凝血因子的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）从人血浆中分离出的冷沉淀为起始原料，用3倍的0.01‑0.05mol/L的Tris‑HCl溶解液溶解，溶解液温度控制在24～26℃，加入肝素钠作为保护剂，终浓度为0.005‑0.065%；（2）一次PEG沉淀：向所述溶解液中加入30%浓PEG1溶液，溶液中最终PEG浓度为2%‑6%，调节溶液pH值至6.5～7.5，搅拌静置后离心；（3）收集离心后的上清液，经澄清过滤后，根据过滤后的体积加入S/D病毒灭活液，使溶液中Tween‑80含量为11.0％、TNBP含量为3.3％，反应液温度控制在24‑26℃，保温6小时；（4）二次PEG沉淀：将灭活后的所述反应液澄清过滤，滤液转至低温反应罐，准确计量过滤液体积，在搅拌条件下加入40%PEG2溶液，溶液中PEG浓度为10%‑16%，调节溶液pH值至5.4～6.0，搅拌静置后离心；（5）沉淀洗涤：收集沉淀，用10%的甘氨酸溶液洗涤3次，洗涤完全后离心，收集沉淀；（6）用1%的甘氨酸溶液溶解，溶解液调pH至7.1～7.3，过滤，配制、除菌分装，冻干、轧盖，干热灭活得到人凝血因子VIII成品。