一种双脱氧核苷修饰的引物方法、反应体系及其在突变检测中的应用

摘要

本发明涉及一种双脱氧核苷修饰的引物方法、反应体系及其在突变检测中的应用。本发明人结合3’末端封闭的引物和高保真DNA聚合酶的3’-5’外切酶校正功能，优化了一种操作简单快捷、灵敏性强、准确度高的检测方法，可广泛用于与点突变、单核苷酸多态性、插入和缺失突变检测相关的领域。

主权项

一种检测待测基因的待测突变位点上是否存在突变的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以待测基因为模板，以正向引物和反向引物为引物，以高保真DNA聚合酶和非高保真DNA聚合酶混合酶进行PCR扩增；所述的正向或反向引物中任一条为辨别性引物，以其3’末端碱基起算第1‑8位的任意1个或多个碱基对应待测突变位点，但与野生型序列相应区段上碱基序列完全匹配；且，所述的辨别性引物的3’末端核苷戊糖3号C的羟基进行双脱氧修饰；所述的正向或反向引物中辨别性引物以外的另一引物位于基因突变位点下游或上游且与相应区段上碱基序列完全匹配；(2)分析PCR扩增产物，若获得扩增产物，则表明待测基因的待测突变位点存在突变；若未获得扩增产物，则表明待测基因的待测突变位点不存在突变。