一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法

摘要

本发明公开了一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，该方法选用经预处理后的不定根的生长点区域细胞诱导出多倍体愈伤组织，再将多倍体愈伤组织经鳞茎芽的诱导培养、鳞茎芽的生根培养及炼苗与移栽步骤来获得川贝母多倍体脱毒苗，创新性的建立了一整套川贝母多倍体脱毒苗的培养方法；该方法脱毒效果好、培养成本低，为川贝母优良品种的快速培育提供了一条新途径。

主权项

一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，包括川贝母组培鳞茎的诱导培养步骤，其特征在于还包括如下步骤：川贝母多倍体不定根的获得：将川贝母组培鳞茎先接种于1/2MS+IBA0.1～0.3mg·L^‑1+秋水仙素200～700mg·L^‑1的培养基中，在无光照和温度为12～18℃的条件下培养2～5天，再转入不含秋水仙素的上述培养基中，在培养温度为18～24℃、每天光照4～8h和光照强度为800～1200lx的条件下继续培养，在川贝母鳞茎的基部有形状粗大的多倍体不定根产生；多倍体不定根的预处理：将多倍体不定根从根基部切下后接入MS+6‑BA 0.1～0.5mg·L^‑1+甘油100～200ml·L^‑1的培养基中,在无光照和培养温度为35～40℃的条件下进行15～25天的预培养处理；多倍体不定根生长点区域细胞的培养：在超净工作台上，切取多倍体不定根上生长点区域的细胞，将其接入愈伤组织诱导培养基B5+6‑BA 0.5～2.0mg.L^‑1+2,4‑D 0.5～4.0mg.L^‑1中，在培养温度为15～22℃、每天光照5～8小时、光照强度为400～1000lx的条件下培养40～60天，获得多倍体愈伤组织；川贝母多倍体鳞茎芽的诱导：选取质地较紧密、生长速度快且颜色为黄白色或淡黄色的多倍体愈伤组织，将其接入多倍体鳞茎芽诱导培养基MS+6‑BA 1.0～4.0mg·L^‑1+IAA 0.1～0.3mg·L^‑1中，在培养温度为18～22℃、每天光照12～20h、光照强度为1000～3000lx的条件下培养45～60天，获得川贝母多倍体鳞茎芽，采用双抗体夹心ELISA方法对培育的川贝母多倍体鳞茎芽进行病毒检测；多倍体鳞茎芽的生根培养：在超净台上切取生长1.0～3.0cm的多倍体鳞茎芽作为无根苗，将其转入生根培养基1/2MS+NAA0.1～0.3mg·L^‑1+IBA0.1～0.3mg·L^‑1中诱导生根，获得川贝母多倍体脱毒苗；炼苗和移栽：选取长出2条以上不定根的川贝母多倍体脱毒苗，打开瓶盖，在室内炼苗3～5天后，将其从培养瓶中取出，洗去不定根上的培养基后，移栽至消毒后的松软土壤中生长。