药典三种秦艽药材的DNA条形码鉴别方法

摘要

本发明公开了药典三种秦艽药材的DNA条形码鉴别方法，药典三种秦艽药材分别为大叶秦艽Gentiana macrophylla Pall、粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie、和麻花秦艽G.straminea Maxim。该鉴别方法包括DNA提取与对得到的DNA序列拼接两大步骤。其中DNA提取通过增加裂解加热的时间，并且用等体积的酚∶三氯甲烷(1∶1)去除酚及多糖类物质的干扰，得到了较好的提取效果。然后将所得到的DNA序列进行拼接后对秦艽进行鉴定，得到了较好的鉴别效果。

主权项

药典三种秦艽药材的DNA条形码鉴别方法，所述药典三种秦艽药材分别为大叶秦艽Gentiana macrophylla Pall.、粗茎秦艽G.crassicaulis Duthie.、和麻花秦艽G.straminea Maxim.；其特征在于包括以下步骤：(1)取过60‑80目筛的秦艽药材粉末加至离心管中，加入适量预热的Buffer PCB和β‑巯基乙醇并混匀，65℃水浴加热35‑45min，间或混匀；用等体积的酚：三氯甲烷反复混匀，离心后取上清，反复操作2‑3次；加入等体积的三氯甲烷，混匀后离心，吸取上层水相至干净的离心管中，加入等体积Buffer BD，混匀，再加等体积的无水乙醇，混匀后全部加入到吸附柱中，静置2‑5min；离心，再分别用适量PW Solution和Wash Solution离心，晾干；将吸附柱放入干净的离心管中，加入60℃预热的TE Buffer，静置后离心，即得DNA溶液；(2)将提取的DNA序列进行PCR扩增与测序，得到ITS、psbA‑trnH和rbcL序列，再将psbA‑trnH和rbcL拼接，ITS、psbA‑trnH和rbcL拼接，得到两条拼接序列，分别计算遗传距离，并构建系统发育树。