| 发明名称 |
SV40LT和hTERT基因重组构建T淋巴细胞模型及其细胞库 |
| 摘要 |
本发明涉及用于医学领域的SV40LT和hTERT基因重组构建T淋巴细胞模型及其细胞库，其主要特征是以T4DNA连接经BamHI酶切质粒SV40LTag DNA及载体pcDNA3.1(-)DNA的产物，构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子；并以Ligation Mix连接经EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo-hTERT和载体pLXSNneo的产物，构建pLXSNneo-hTERT重组子，两重组子经感受态细胞扩增纯化和鉴定后以脂质体转染T淋巴细胞，经G418筛选含阳性重组子的细胞并扩大培养，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞端粒酶活性、SV40LT和hTERT mRNA表达、免疫组化、细胞增殖周期及其凋亡率符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT和hTERT基因重组构建的T淋巴细胞模型冻存于液氮中，为从细胞水平在体外长期研究其发病机制奠定基础。 |
| 申请公布号 |
CN104419723A |
申请公布日期 |
2015.03.18 |
| 申请号 |
CN201310403878.5 |
申请日期 |
2013.09.01 |
| 申请人 |
翁炳焕 |
发明人 |
翁炳焕;蔡志坚;徐向荣;毛愉婵;孙亚莉;吕时铭 |
| 分类号 |
C12N15/85(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I;C40B40/02(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/85(2006.01)I |
| 代理机构 |
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代理人 |
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| 主权项 |
一种用于医学领域的SV40LT和hTERT基因重组构建T淋巴细胞模型及其细胞库的方法，其主要特征是以T4DNA连接经BamHI酶切质粒SV40LTag DNA及载体pcDNA3.1(‑)DNA的产物，构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子；并以Ligation Mix连接经EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo‑hTERT和载体pLXSNneo的产物，构建pLXSNneo‑hTERT重组子，两重组子经感受态细胞扩增纯化和鉴定后以脂质体转染T淋巴细胞，经G418筛选含阳性重组子的细胞并扩大培养，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞端粒酶活性、SV40LT和hTERT mRNA表达、免疫组化、细胞增殖周期及其凋亡率符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT和hTERT基因重组构建的T淋巴细胞模型冻存于液氮中，为从细胞水平(替代人体或动物直接试验)在体外长期研究其发病机制奠定基础。 |
| 地址 |
317300 浙江省仙居县城关水阁路1号仙居县人民医院 |
