抗原特异性结合蛋白或配体特异性结合蛋白的鉴定

摘要

本发明披露了用于在体外在脊椎动物宿主细胞中产生、表达以及筛选多样的结合蛋白(例如，抗体或其片段)集合的新颖方法、用于鉴定和分离配体特异结合蛋白或抗原特异性结合蛋白的新颖方法。在此披露的这些方法允许从至少一种载体构建体表达多样的结合蛋白集合，这些载体构建体任选地可以在转移并且原位表达到脊椎动物宿主细胞中时产生多样结合蛋白集合。

主权项

用于分离并且鉴定至少一种核苷酸序列的方法，该核苷酸序列编码了对于令人希望的抗原或配体特异的抗体或其片段，所述方法包括以下步骤：(a)通过使用无复制能力的逆转录病毒颗粒将至少一种逆转录病毒表达构建体转导到脊椎动物宿主细胞中，该表达构建体编码了抗体或其片段，其中所述至少一种构建体稳定地整合到宿主细胞基因组中，从而转导的宿主细胞能够在其细胞表面表达和展示所述抗体或其片段，且其中所述脊椎动物宿主细胞是前体B淋巴细胞，其内源性地表达了促进所述抗体或其片段的膜沉积的lgα以及Igβ分子，且不能表达内源抗体多肽类和至少一种替代轻链组分；(b)将所述抗体或其片段稳定表达于所述脊椎动物宿主细胞中且将其展示于所述细胞的细胞表面；(c)通过将展示特异性抗原结合的细胞从未结合的细胞群中分离出来，从而选择性地分离对所述令人希望的抗原或配体具有高亲和力的强抗体结合物，基于其与所述令人希望的抗原或配体相结合的能力将表达所述抗体或其片段的脊椎动物宿主细胞富集；并且(d)对来自这些经逆转录病毒转导的并且富集的脊椎动物宿主细胞的、编码了所述抗体或其片段的所述至少一种核苷酸序列进行分离并且鉴定。