一种高龙脑含量的龙脑樟组培繁育方法

摘要

本发明公开一种高龙脑含量的龙脑樟组培繁育方法。本发明从龙脑樟天然变异中选育出龙脑含量达90％以上的龙脑樟个体，采集当年抽梢的半木质化茎段作为外植体，经消毒处理后，建立无菌系，再通过芽的初生诱导、增殖培养、生根培养等，形成再生植株。本发明筛选出了高龙脑含量的龙脑樟组培繁殖各个环节的适宜配方及培养条件，成功的获得了高龙脑含量的龙脑樟再生植株。因此本发明有效的解决了龙脑含量90％以上的龙脑樟组培繁育中出现褐化和死苗的技术难题，将为优良龙脑樟原料林基地的建设提供种苗保障。

主权项

一种高龙脑含量的龙脑樟组培繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：a、无菌系的建立：以叶精油中龙脑含量90％～97％的高龙脑含量龙脑樟母树当年生枝条作为外植体，经灭菌后，接种于诱导培养基中，在光照强度2000～3000Lux，12h/天，温度20～30℃下培养，直到长出初生芽，所述的诱导培养基每升含有：6‑BA5.0～7.0mg、IBA2.0～3.0mg、白糖30g、卡拉胶5.0g，其余为改良MS培养基，pH5.6～5.8；b、增殖培养：将初生芽接种到第一增殖培养基上，在光照强度2500Lux～3000Lux，温度23～28℃下增殖培养，继代若干个周期后，待芽基部分化出不定芽并有白色愈伤组织产生时，再接种到第二增殖培养基上，在光照强度2500Lux～3000Lux，温度23～28℃下增殖培养，获得增殖苗，所述的第一增殖培养基每升含有：6‑BA 5.0～7.0mg、IBA2.0～3.0mg、卡拉胶3.0g，其余为改良MS培养基，pH6.8～7.0；所述的第二增殖培养基每升含有：6‑BA 0.5～3.5mg、IBA2.0～3.0mg、VB₂10～30mg、卡拉胶3.0g，余量为改良MS培养基，pH6.8～7.0；c、生根培养：剪取增殖苗中具有4～5片叶且叶面完全展开、光滑发亮的无根小苗，接入生根培养基中，在光照强度2000～3000Lux，12h/d，温度20～30℃下进行生根培养，得到生根苗，所述的生根培养基每升含有：NAA0.5～1.5 mg、IBA0.1～1.0mg、白糖30g、卡拉胶5.0g，其余为改良MS培养基，pH5.6～5.8；d、组培苗移栽：将生根苗洗去基部培养基后再移植到基质中，移植后浇足定根水，常规育苗管理，满足水肥供应，长出高龙脑含量的龙脑樟幼苗，所述的基质是由红壤心土和草木灰按照质量比3:1的比例混合搅拌均匀而成，；所述的改良MS培养基，每升含有：(1)大量元素：硝酸钾1900mg，硝酸铵800mg，硫酸镁﹒7H₂O 370 mg，硝酸钙﹒4H₂O 200mg，氯化钙﹒2H₂O 437mg，磷酸二氢钾170mg，(2)铁盐：硫酸亚铁﹒7H₂O 27.8mg，乙二胺四乙酸二钠37.3mg；(3)微量元素：硼酸10mg，硫酸锰﹒H₂O 25mg，硫酸锌﹒7H₂O 10mg，钼酸钠﹒2H₂O 0.25mg，硫酸铜﹒5H₂O 0.025mg；(4)有机成分：肌醇100mg，抗坏血酸10mg，盐酸硫胺素0.5mg，烟酸5mg，盐酸吡哆辛0.5mg，甘氨酸2mg，余量为水。