靶特异性非抗体蛋白质及其制备方法

摘要

本发明涉及一种制备靶特异性非抗体蛋白质的方法，更具体地，涉及一种制备靶特异性非抗体蛋白质的方法，包括步骤：从非抗体蛋白质文库中选择具有与靶蛋白质的靶位点有结构互补性的非抗体蛋白质；计算所选择的非抗体蛋白质与靶蛋白质之间的结合能；从所选择的非抗体蛋白质中选择具有理想结合能的非抗体蛋白质；从选择的非抗体蛋白质与靶蛋白质的界面氨基酸残基中选择具有高结合能的氨基酸残基；用具有低结合能的氨基酸残基替代选定的氨基酸残基。另外，本发明涉及用这种方法制备的、与EGFR(表皮生长因子受体)结构域2特异性结合的靶特异性的非抗体蛋白质，以及含有该靶特异性非抗体蛋白质的癌症治疗组合物。

主权项

一种制备靶特异性非抗体蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)在非抗体蛋白质文库中，选择与靶蛋白质的靶位点具有结构互补性的非抗体蛋白质；(b)计算所选择的非抗体蛋白质和靶蛋白质之间的结合能；(c)从所选择的非抗体蛋白质中，选择具有最低结合能的非抗体蛋白质；(d)从所选择的非抗体蛋白质与靶蛋白质的界面氨基酸残基中，选择具有高结合能的氨基酸残基；和(e)用具有较低结合能的氨基酸残基替代步骤(d)中选择的氨基酸残基，其中，步骤(a)中的非抗体蛋白质文库包括非抗体蛋白质，所述非抗体蛋白质分子量为10‑40kDa，选自人类蛋白质，并能够形成单体、同源二聚体和同源三聚体中的任何一种或多种，步骤(a)中的靶蛋白是EGFR(表皮生长因子受体)结构域2，其中，步骤(a)中的文库是用包含以下步骤的方法构建的：(i)从人类蛋白质中选择具有10‑40kDa分子量的蛋白质；(ii)从步骤(i)中选择的蛋白质中排除膜蛋白质和抗体蛋白质；(iii)从步骤(ii)中剩余的蛋白质中选择具有10或更少种已知相互作用的蛋白质；和(iv)从步骤(iii)中选择的蛋白质中选择能形成单体、同源二聚体和同源三聚体中的任一或多种的蛋白质，其中，步骤(a)中用对接模拟进行选择，其中，步骤(e)是用噬菌体展示和生物筛选(bio‑panning)技术进行的。