人白细胞介素-2蛋白质的制备方法

摘要

一种人白细胞介素2(IL-2)蛋白质的制备方法，通过在人类胚肾细胞293F细胞内表达重组人类白细胞介素-2(IL-2)基因进行制备，其步骤如下：IL-2基因的克隆、IL-2蛋白表达筛选、IL-2蛋白质纯化以及IL-2内毒素检测。本发明的方法可以大剂量提纯精制其表达的融合蛋白产物，可进行严格的质量控制且有着非常强的实用性。

主权项

一种人白细胞介素‑2(IL‑2)蛋白质的制备方法，通过在人类胚肾细胞293F细胞内表达重组人类IL‑2基因进行制备，其特征在于如下步骤：1)IL‑2基因的克隆先通过PCR扩增连接物(KSS)和IL‑2片段，然后利用琼脂糖凝胶回收PCR产物KSS和IL‑2，将琼脂糖凝胶回收载体片段(pTT5)与琼脂糖凝胶回收产物KSS及IL‑2连接并转染入菌，经培养挑取菌落做PCR，根据PCR结果测序，最后将正确的pTT5‑KSS‑IL‑2进行克隆，提取质粒；2)IL‑2蛋白表达筛选先进行人类胚肾细胞293F细胞瞬时转染优化实验，通过测定其蛋白在瞬时转染293F细胞中的表达量，筛选出高表达的最佳条件，进行IL‑2蛋白的表达；3)IL‑2蛋白质的纯化精制对目标IL‑2蛋白质进行分离纯化，并对其进行定量分析；4)IL‑2内毒素检测将步骤(3)中纯化后的IL‑2进行内毒素含量的检测。