利用通过核酸外切酶和核酸内切酶二者切割的寡核苷酸探针进行的核酸检测

摘要

公开了一种生物化学和分子生物学领域的方法。该方法涉及改善被标记寡核苷酸探针的切割动力学，因此提高了检测核酸过程中的信噪比。

主权项

一种检测试样中的目标序列的方法，所述方法包括：(a)扩增试样中的目标序列以产生增加数量的目标序列的拷贝，扩增包括：将第一引物和第二引物杂交到试样中的目标核酸以获得目标核酸和引物的杂交产物，以及利用依赖模板的核酸聚合酶来延伸杂交产物的第一引物和第二引物以产生延伸引物产物；(b)将延伸引物产物杂交到至少一个探针寡核苷酸，以获得延伸引物产物:探针寡核苷酸的杂交产物，其中，探针包括5’‑DNA序列和RNA序列，并且结合到可检测标记；(c)使延伸引物产物:探针寡核苷酸的杂交产物接触RNase H和核酸外切酶活性，所述RNase H和核酸外切酶同时存在；(d)检测由探针上的标记所发射的信号的增强，其中，信号的增强表示试样中存在目标序列，并且所述信号的强度与在缺少RNase H时执行的相同检测方法所获得的信号强度相比要高1％或更多。