一种草乌甲素的高效提取分离方法

摘要

一种草乌甲素的高效提取分离方法，包括前处理、浸提、浓缩、酸化、碱化、萃取、柱层析、结晶步骤。该方法用含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液提取三次，碱化在搅拌下缓缓加入浓氨水调pH至8，降低了草乌甲素的损耗；硅胶柱层析，合理有效控制柱层析流速为13～20ml/min，分离效果更佳；用乙酸乙酯萃取，可使溶剂残留物为零，草乌甲素含量最高可达到98～99％，产品纯度高，在草乌药材中草乌甲素的提取率可提高到1.5～2.2‰。本发明方法应用无毒或低毒的有机溶剂和减少有机溶剂种类及使用量，降耗节能，减少了人员危害和环境污染。

主权项

一种草乌甲素的高效提取分离方法，包括以下步骤：(1)前处理：取草乌药材，去除杂质，粉碎成粗粉；(2)浸提、浓缩：取草乌药材粗粉，置圆底烧瓶中，加入含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液提取三次，第一次提取：在草乌药材粗粉中加入为草乌药材粗粉重量3.2倍重量的所述含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液，控制蒸汽压力0.1MPa，加热至60℃保温浸提12小时，过滤，收集滤液；第二、三次采用与第一次同样的方法分别在每次的滤渣中加入为滤渣重量2.4倍重量的所述含硫酸3‰的酸性75％乙醇溶液，分别提取2～4小时，过滤，收集滤液，合并三次提取液滤，在0.02～0.04MPa真空浓缩回收至无醇味，浓缩液加入为浓缩液重量1.5倍重量纯化水稀释至相对密度为1.05～1.07；(3)酸化、碱化：在步骤(2)稀释至相对密度为1.05～1.07的稀释液中加入10％稀硫酸调pH至2，静置24小时，过滤，滤液在搅拌下缓缓加入浓氨水调pH至8，静置24小时，过滤，滤液备用；(4)萃取：将步骤(3)碱化的滤液注入分液漏斗，加入为所述碱化的滤液体积1.6～2倍体积的乙酸乙酯，搅拌萃取30min～45min，静置2～3小时，分离上层乙酸乙酯萃取液，下层水液按上述萃取方法操作，重复萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；将合并的乙酸乙酯萃取液在0.02～0.04MPa真空浓缩，控制温度在60℃±5℃，浓缩回收乙酸乙酯至稠膏状，收集稠膏，在稠膏中加入为所述稠膏重量10倍重量纯化水充分搅匀，搅拌下加入浓度为10％的稀硫酸溶液调pH至2使稠膏完全溶解，静置12小时，过滤，滤液在搅拌下缓缓加入浓氨水调pH至8.5～9，使沉淀完全，静置12小时，过滤，沉淀用纯化水洗至pH呈中性，收集沉淀，即得草乌总碱；草乌总碱用乙酸乙酯溶解后，加入为草乌总碱重量0.6～1.2倍重量硅胶混合均匀，干燥控制水分≤15％，装入洁净容器中，密封；(5)柱层析：硅胶柱层析，用石油醚：乙酸乙酯：三乙胺的体积比＝4:1:0.075的溶剂系统进行洗脱，控制流速13～20ml/min，通过薄层色谱检识观察洗脱情况，分段收集含草乌甲素的洗脱液，合并所述洗脱液；(6)结晶：用旋转蒸发仪0.02～0.04MPa真空浓缩合并的洗脱液，温度60℃±5℃，即得草乌甲素粗品结晶；将草乌甲素粗品置圆底烧瓶中，加入为草乌甲素粗品重量4倍重量的乙酸乙酯使草乌甲素粗品充分溶解，在0.02～0.04MPa真空浓缩至1/3体积，用石油醚边加边振摇至晶体析出，静置使结晶完全，过滤，再用石油醚洗涤结晶至颜色成均一的白色结晶，干燥，即为草乌甲素纯品；以上步骤中所述的百分数为质量分数，所述的千分数为质量分数。