一种快速提取杉木总RNA的方法

摘要

本发明涉及一种从植物组织中快速提取总RNA的方法，特别涉及一种从富含多酚等次生代谢产物的植物组织中提取总RNA的方法。本发明的目的在于提供一种简单、经济、高效的快速提取杉木总RNA的方法，为研究人员在实际工作中提供更多的选择。所提取的RNA质量高，可以满足RT-PCR、Northern杂交等基因分离和表达分析等研究的需要，同时可以大大降低实验的成本。本发明通过将SDS提取液和巯基乙醇混合提取，离心柱纯化，可对杉木组织的RNA进行快速提取，大大缩短时间及降低实验成本，提取的RNA纯度较高，可以满足分子生物学研究的需求。

主权项

一种快速提取杉木总RNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）在1.5 ml离心管中混匀如下液体：1 ml SDS提取液和40‑60μl 巯基乙醇，记为提取液A； （2）取90‑120mg新鲜杉木材料放到2 ml离心管中，并加入钢珠，迅速放到液氮中速冻，用高通量组织研磨仪研磨成粉末； （3）向研磨后的离心管中迅速加入0.8‑1.5 ml提取液A，涡旋混匀，室温静置8‑15 min，4℃，13000g离心10‑20 min；（4）吸取500‑700μl上清至一新的1.5 ml离心管中，加入200‑400μl 5 mol/L NaCl和400‑600μl氯仿，混匀，4℃，13000g离心4‑7 min；（5）吸取500‑700μl上清，加入等体积的水饱和酚：氯仿v/v=1:1的混合液，混匀，4℃，13000g离心4‑7 min；    （6）吸取300‑500μl上清于一新的1.5 ml离心管中，加入等体积预冷的异丙醇，于室温下在侧摆摇床上摇匀10 min；    （7）将上述摇匀后的液体吸入到离心柱中，4℃，13000g离心1‑3 min；    （8）加入75%预冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，13000g离心1‑3 min；    （9）重复步骤（8）；    （10）弃液，4℃，13000g空离心1‑3 min；    （11）更换底部的收集管为新的1.5 ml无RNA酶离心管，向上述离心柱中央加入30‑50μl DEPC水，静置2‑5 min，4℃，13000g离心1‑3 min；    （12）将离心后离心管底部的液体重新吸入离心柱中，静置2‑5 min，4℃，13000g离心1‑3 min；    （13）弃离心柱，将新的收集管‑20℃保存备用。