一种6-羧基荧光素的制备方法

摘要

本发明公开了一种6-羧基荧光素的制备方法，所述的方法包括以下步骤：a、反应步骤；b、结晶步骤；c、水解步骤。本发明与现有技术相比，使用金属催化剂四氯化锡（SnCl₄）选择性催化反应，制备6-羧基荧光素，在分离纯化中选择合适的混合溶剂的比例及纯化方法，将所需产物6-羧基荧光素与副产物5-羧基荧光素比例从1:1提高到2.6:1, 分离产率提高到原来的1.9倍 (从32%提高到61%左右)。大大降低了生产成本，减化了提纯过程，为制备广泛用于荧光标记生物大分子的6-羧基荧光素及其衍生物提供了一种高效实用的新工艺方法，具有很高的应用价值。

主权项

一种6‑羧基荧光素的制备方法，包括以下步骤：a、反应步骤；b、结晶步骤；c、水解步骤； 所述的a、反应步骤： 室温下，在反应容器中，将间苯二酚类物质溶于甲基磺酸，再加入偏苯三酸酐，室温搅拌均匀，加入四氯化锡，升温至90‑110℃，保温6‑10小时后，将反应体系冷至室温，得到反应溶液； 偏苯三酸酐、间苯二酚类物质、四氯化锡的摩尔比为1：2：0.2‑0.22； 所述的b、结晶步骤： 将反应溶液倒入冰水溶液中，搅拌10‑15分钟，产物沉淀析出，过滤，干燥，再用体积比为1:4甲醇和己烷混合溶液进行重结晶，过滤，干燥，得到6‑羧基荧光素甲基磺酸加合物； 所述的c、水解步骤： 将6‑羧基荧光素甲基磺酸加合物加入4M NaOH水溶液中，室温搅拌1‑2小时后，得到6‑羧基荧光素钠盐；6‑羧基荧光素甲基磺酸加合物与NaOH的摩尔比为1:1.2‑1.3； 再将6‑羧基荧光素钠盐溶液加入6N HCl水溶液中，室温搅拌1‑2小时后，产物沉淀析出，干燥至恒重，得到自由酸式6‑羧基荧光素，6‑羧基荧光素钠盐与HCl的摩尔比为1：0.5‑0.6；所述间苯二酚类物质选自间苯二酚、4‑氯间苯二酚、4‑甲基间苯二酚中的一种。