猪Six1蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公布了一种猪Six1蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法。通过设计引物克隆猪Six1基因；大肠杆菌重组表达载体pET-30a(+)-pSix1的构建；将构建的重组表达载体pET-30a(+)-pSix1转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，构建表达猪Six1蛋白的重组菌株；对重组菌株进行优化诱导表达条件，纯化重组猪Six1蛋白；以纯化的重组猪Six1蛋白为抗原，采用常规多克隆抗体制备方法制备猪Six1多克隆抗体。通过本发明的方法，实现了猪Six1蛋白的体外表达和制备出了效价高、特异性好的猪Six1多克隆抗体，完全可以满足相关实验的需要。

主权项

一种猪Six1蛋白的体外表达方法，其特征是：包括下列步骤：(1)提取猪背最长肌总RNA；(2)构建用于表达猪Six1蛋白的大肠杆菌重组表达载体；(3)将重组表达载体导入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中，构建携带重组表达载体的基因工程菌；(4)培养基因工程菌至OD₆₀₀达到0.4～0.6，加入诱导剂IPTG，诱导猪Six1基因在该基因工程菌中表达；(5)纯化表达系统表达的重组猪Six1；(6)重组猪Six1蛋白表达形式的鉴定。