生物工程菌株及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了生物工程菌株及其制备方法和用途，其中制备生物工程菌株的方法包括：1)以假单胞菌株M18G基因组DNA为模板，获得第一扩增产物和第二扩增产物；2)利用重叠基因扩增技术将第一和第二扩增产物进行连接处理；3)将连接产物经EcoRI和PstI酶切后插入质粒pK18mobsacB中形成重组质粒pK18DU1；4)将重组质粒导入E.coli S17-1；5)将重组大肠杆菌与M18G进行双亲杂交交换获得M18GU；6)将重组表达质粒pBBRphzH转入M18GU，获得生物工程菌株M18GU/pBBRphzH。该菌株能高效生产吩嗪-1-甲酰胺，且发酵效价稳定，生产成本低，适宜于大规模生产。

主权项

一种制备生物工程菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以假单胞菌株M18G基因组DNA为模板，分别利用第一引物和第二引物进行第一PCR扩增获得第一扩增产物，利用第三引物和第四引物进行第二PCR扩增获得第二扩增产物，其中，所述第一扩增产物具有SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，所述第二扩增产物具有SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列；2)利用重叠基因扩增技术，将所述第一扩增产物和所述第二扩增产物进行连接处理，以便获得连接产物，所述连接产物具有SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；3)将所述连接产物经EcoRI和PstI酶切后，插入质粒pK18mobsacB中，形成重组质粒pK18DU1；4)将所述重组质粒导入E.coli S17‑1，以便获得重组大肠杆菌菌株；5)将所述重组大肠杆菌菌株与所述假单胞菌株M18G进行双亲杂交交换，以便获得假单胞菌株M18GU；6)将携带phzH基因的重组表达质粒pBBRphzH转入所述假单胞菌株M18GU，以便获得携带phzH基因的重组表达质粒的生物工程菌株M18GU/pBBRphzH。