去甲肾上腺素完全抗原的制备方法及偶联摩尔比测定方法

摘要

本发明公开了一种去甲肾上腺素（NE）完全抗原的制备方法及偶联摩尔比测定方法，解决了现有去甲肾上腺素是小分子结构，激发不了动物机体产生抗体的问题，技术方案包括将NE与载体偶联、纯化、同时制备载体mannich对照，并通过紫外分光光度计对载体、载体mannich对照、NE标准品及偶联物在200-500nm之间进行扫描，并进行图形化比对，判定偶联是否成功，并进一步通过摩尔消光系数法计算NE与载体载体的偶联摩尔比。本发明方法能生产出高品质的完全抗原，具有方法简单、生产周期短，生产成本低的优点，适用于NE的免疫学检测方法。

主权项

一种去甲肾上腺素完全抗原的制备方法，其特征在于，包括下述步骤，(1)将去甲肾上腺素与载体分别溶于1.2mol/L NaAc溶液中,分别制备34mmol/L去甲肾上腺素溶液和3.4mmol/L载体溶液，按照去甲肾上腺素与载体摩尔比10‑20：1的比例，将去甲肾上腺素溶液缓慢加入到载体溶液中，缓慢滴加，边滴加边搅拌，混匀后制成混合溶液，然后在搅拌下缓慢滴加与混合溶液等体积的体积浓度为3％甲醛溶液，滴加完以后，用1.2mol/L NaAc溶液调节pH值在6.0‑6.5之间，4℃持续搅拌，反应20－28小时，得到反应混合液；所述载体为牛血清白蛋白或卵清白蛋白或血蓝蛋白；(2)反应混合液通过超滤、透析或者脱盐柱法除去反应混合液中未偶联上的小分子物质,缓冲液采用pH为7.2的0.01M磷酸盐缓冲液，得到偶联物；(3)按照步骤1和步骤2的方法，反应体系缺失去甲肾上腺素，维持其他各反应条件不变的条件下，制得载体mannich对照；(4)采用紫外分光光度计对载体、载体mannich对照、去甲肾上腺素标准品及偶联物在200‑500nm之间进行扫描，在同坐标上进行图形比对，在偶联物与载体mannich对照浓度相同的情况下，如果偶联物比载体mannich对照多出特征吸收峰，则判定偶联成功，即得到去甲肾上腺素完全抗原。