| 摘要 |
Спосіб визначення концентрації специфічних білків у біологічних рідинах включає проведення адсорбції аналізованого зразка на нітроцелюлозній мембрані, блокування вільних сайтів зв'язування, інкубацію з первинними антитілами, з подальшим промиванням та інкубацією із вторинними антитілами, міченими пероксидазою хрону, внесення субстрату і фарбування мембрани. На стадії адсорбції зразки у відповідному розведенні наносять на поверхню нітроцелюлозної мембрани по 3 μl, для блокування використовують твін-фосфатний буфер, що містить 20 мг/мл знежиреного сухого молока. На стадії інкубації використовують моноспецифічні поліклональні антитіла до білка, що визначається, на етапі підготовки мембрани до фарбування інкубують з вторинними, кон'югованими з пероксидазою хрону, антитілами до первинних антитіл, отримане на мембрані зображення конвертується у цифровий формат з подальшим колориметричним аналізом за інтенсивністю забарвлення крапок нанесених зразків і розрахунком концентрації білка, що визначається, за калібрувальним графіком. |
