一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等步骤，本发明方法所制备的漏斗泡囊草愈伤组织稳定、均一、分散性好，悬浮细胞生长良好、增殖速率快，为其药用资源的开发和利用提供技术基础。

主权项

一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：（1）取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6‑BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.1‑0.15µmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25‑0.3g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮‑196℃中保存。