一种非洲猪瘟PCR检测方法及寡核苷酸引物对

摘要

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种用于检测非洲猪瘟的PCR方法及寡核苷酸引物对。参照GenBank收录的23株ASFVP72蛋白全基因序列，设计一对特异性引物，根据设计的引物，探索最佳反应体系和反应条件，并对建立的PCR反应方法进行敏感性试验、特异性试验、重复性试验，对来自14个猪场中患有繁殖障碍母猪或具有呼吸障碍症状的仔猪和流产胎儿的临床样本进行PCR方法检测。试验结果表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。本研究所建立的PCR检测方法具有很好的应用性,能够用于非洲猪瘟疫病的检测。

主权项

一种非诊断目的检测非洲猪瘟的PCR方法，其特征在于：该方法是针对GenBank上已发表的非洲猪瘟P72蛋白的基因序列，经过反复比对，选取其高度保守区域，设计合成引物，选取最佳退火温度和反应体系，针对非洲猪瘟病毒建立PCR反应体系，其中，参照GenBank收录的23株ASFVP72蛋白全基因序列，通过Prime5软件对其序列进行比对，选择保守区域为引物设计区，通过Prime5软件设计一对特异性寡核苷酸引物对，所述寡核苷酸引物对序列如下：PCR最佳反应条件：95℃5min；94℃30s，55℃40s，72℃1min，循环35次；72℃延伸10min，PCR反应体系总体积为25μL，由10×PCR Buffer 2.5μL，2.5mmol/L的dNTP Mixture 2μL，TaKaRa rTaq 0.25μL，上下游寡核苷酸引物各0.5μL，DNA模板2μL，灭菌双蒸水17.25μL组成。