一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法。该方法包括：通过蝙蝠蛾拟青霉菌株的一级种子培养，接种发酵，获得蝙蝠蛾拟青霉发酵液，所得的发酵液经过乙醇沉淀、去离子水复溶、脱蛋白、冷冻干燥、DEAE-52柱层析等工序分离出蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白。本发明的工艺方法具有工艺简单、提取条件温和、成本低、对环境友好，易于工业化生产等优点，所得到的蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白可用作药品和保健食品原料。

主权项

一种蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)HN1菌株胞外酸性糖蛋白的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)从保存于土豆斜面培养基的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)HN1菌株的母种中挖取大小约为0.5cm×0.5cm菌丝体块，接种于装有100mL种子培养基的容量为250mL的三角瓶中，该种子培养基的组成为：蔗糖30.00g/L，酵母膏6.00g/L，磷酸二氢钾1.50g/L，硫酸镁0.50g/L，麦芽汁10.00g/L，土豆汁10.00g/L，pH6.5，然后于17℃下静止培养12小时后，再置于120转/分钟的摇床上振荡培养72小时，即可获得种子液；(2)取步骤(1)中的种子液按发酵培养基体积的1％接种于装有200mL发酵培养基的容量为500mL的三角瓶中，该发酵培养基的组成为：蔗糖50.86g/L，酵母膏2.00g/L，硫酸铵6.61g/L，磷酸二氢钾1.36g/L，硫酸镁0.05g/L，土豆汁15.00g/L，麦芽汁15.00g/L，pH6.5，然后于17℃下静止培养12小时后，再置于120转/分钟的摇床上振荡培养120小时，培养结束后将发酵产物于4000转/分钟条件下离心15min后，收集上清液即为蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)HN1菌株发酵液；(3)将步骤(2)中获得的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)HN1菌株发酵液，50℃减压浓缩至原体积的1/2，加3倍体积的无水乙醇，沉淀12小时，用80％乙醇洗涤3次后，在4000转/分钟条件下离心15min收集沉淀即可获得胞外粗多糖；(4)将步骤(3)制得的胞外粗多糖通风挥去乙醇，加少量去离子水复溶后，用氯仿和正丁醇体积比为4∶1的混合溶液脱蛋白3次后，将水相溶液冷冻干燥以获得粗多糖冷冻干粉；(5)将步骤(4)所得粗多糖溶解后，上样于DEAE‑52纤维素柱，并分别用去离子水、0.1mol/LNaCl和0.3mol/L NaCl进行洗脱，将收集的0.3mol/L NaCl洗脱组分进行减压浓缩，去离子水透析72小时，浓缩后冷冻干燥，即可得到灰白色粉末的酸性糖蛋白组分，该组分中多糖含量为80.56％，蛋白质含量为18.76％；(6)将步骤(5)所得酸性糖蛋白用分子排阻色谱检测其分子量分布情况，用红外光谱分析特征基团组成，用紫外光谱扫描确定其是否具有蛋白质组分。