一种快速定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法

摘要

本发明公开了一种快速定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡，纸条组件包括了试纸条和独立包装的铂卟啉标记特异抗体，该试纸条包括了底衬，粘附于底衬上的包被分析膜、粘附于底衬上且与硝酸纤维膜的其中一端接合的样品垫和粘附于底衬上且与硝酸纤维膜的另一端接合的吸水垫，包被分析膜上设有检测线和质控线；所述检测线包被抗肌钙蛋白T单克隆抗体，质控线包被兔IgG抗体，检测卡则将一卡盒和试纸条组件结合即可，应用本发明所提供的试纸条以及检测卡检测人血液、血清或血浆中肌钙蛋白T，操作简单、快速、灵敏和特异性好等特点，具有良好的临床应用前景。

主权项

一种快速定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：包括试纸条和与试纸条配合使用且独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括底衬(1)、依次接合在底衬(1)上的吸水垫(2)、包被分析膜(3)及样品垫(6)，该包被分析膜上(3)设有检测线(4)和质控线(5)，检测线(4)包被的特异抗体为抗肌钙蛋白T单克隆抗体，质控线(5)包被的特异抗体为兔IgG抗体；铂卟啉标记特异抗体为抗肌钙蛋白T单克隆抗体和抗兔IgG抗体；其中所述的定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸条组件的制备方法包括以下步骤：1)抗体的制备：选用纯化的基因工程表达的抗肌钙蛋白T单克隆抗体、抗兔IgG抗体和纯化的兔IgG；2)包被分析膜(3)的制备：采用喷膜机分别在一硝酸纤维膜上画检测线(4)和质控线(5)，划线细致均匀，检测线(4)与质控线(5)间隔5mm；用检测线包被缓冲液稀释抗肌钙蛋白T单克隆抗体至浓度为10‑20ug/ml，采用喷膜机将抗肌钙蛋白T单克隆抗体喷印在硝酸纤维膜的检测线(4)上；用质控线包被缓冲液稀释纯化的兔IgG抗体至浓度为10‑20ug/ml，采用喷膜机将纯化的兔IgG抗体对应喷印在硝酸纤维膜的质控线(5)上；将喷膜后的硝酸纤维膜放入25‑40℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；3)样品垫(6)的制备：将玻璃纤维膜用含0.01％‑0.5％聚乙二醇、1％‑5％牛血清白蛋白、0.01％‑0.05％表面活性剂的0.04M磷酸盐缓冲液浸泡，放入30‑50℃的真空干燥箱内，干燥后即成样品垫(6)，取出密封备用；4)铂卟啉标记特异抗体的制备：将肌钙蛋白T单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，分别加入30‑50mg的铂卟啉溶解液，搅匀，室温孵育1小时，每隔15分钟混匀一次，最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的铂卟啉标记抗体，用0.02M磷酸盐缓冲液稀释混匀后于4℃保存；5)免疫荧光试纸条的制备：先将包被分析膜粘附在底衬(1)中间位置上，在包被分析膜(3)一端粘附吸水垫(2)，二者重叠1‑2mm；在包被分析膜(3)另一端粘附样品垫(6)，二者重叠1‑2mm；再将黏贴好包被分析膜(3)、吸水垫(2)和样品垫(6)的底衬(1)裁切成细条,即成一种快速定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸。