一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养等步骤，本发明方法所制备的鸦胆子悬浮细胞增殖率高，操作工艺简单可控，生长周期短，有利于鸦胆子有效成分的开发和利用。

主权项

一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：（1）采取鸦胆子近芽处幼嫩的叶片，在超净工作台上对其进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接种入MS+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+链霉素15mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，光照强度1000lx，光期6h，暗期18h；（3）取步骤（2）中诱导出来的鸦胆子愈伤组织接入MS+ABA1.5mg/L+IAA0.3mg/L+GA₃1.5mg/L+1g/L柠檬酸，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照1000lx，温度25‑28℃；（4）取步骤（3）增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基MS+NAA0.05‑0.2mg/L+TDZ0.1‑0.5mg/L+3‑5mmol/L叶酸+500mg/L椰乳，5周后称重计算增殖率。