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一种检测上皮性卵巢癌的基因探针组合物，其特征在于：该基因探针组合物由c‑myc基因探针,Rb1基因探针,Chk2基因探针,p53基因探针和BRCA1基因探针组成，上述基因探针均为经过荧光素标记的探针；所述基因探针组合物是由以下方法制备的：1)、克隆筛选：检索UCSC genome browser，NCBI Clone Registry，Ensembl Genome Browser数据库分别含有c‑myc、Rb1、Chk2、p53、BRCA1基因的所有细菌人工染色体克隆，并对这些克隆进行筛选，选出最佳的克隆； 2)、克隆培养和鉴定：按照筛选确定的克隆编号购买美国Invitrogen公司的BAC克隆，取5‑10微升克隆菌液加到3‑5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37℃振摇活化培养8‑16小时；然后将菌液全部加入至400‑500毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37℃震摇培养8‑16小时；对c‑myc、Rb1、Chk2、p53、BRCA1的BAC克隆用相对应的基因引物进行多聚酶链式反应扩增，用1‑2%的琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，从而完成待选克隆的分子鉴定； 3)、基因探针的制备和鉴定：获得目的基因的克隆后，提取大量DNA，酶切DNA后采用缺口平移的方法对酶切后的DNA进行荧光素标记，再对c‑myc,Rb1,Chk2,p53和BRCA1基因探针组合后进行沉淀和浓缩，将制作好的探针组合物溶解到含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液中，即得荧光标记探针组杂交混合液，采用正常人外周血单个核细胞甩片进行探针鉴定;上述1)、克隆筛选步骤针对c‑myc、Rb1、Chk2、p53、BRCA1基因选出的最佳克隆分别为： c‑myc基因：RP11‑440N18, 来自UCSC genome browser； Rb1基因：RP11‑305D15，来自UCSC genome browser； Chk2基因：RP11‑73I4，来自UCSC genome browser； p53基因：RP11‑1081A10，来自UCSC genome browser； BRCA1基因:RP11‑831F13，来自UCSC genome browser；上述2）、克隆培养和鉴定步骤中对c‑myc、Rb1、Chk2、p53、BRCA1的BAC克隆相对应的基因引物序列为： c‑myc基因探针:上游引物:TACTGCGACGAGGAGGAGAA(SEQ ID NO:1) 下游引物:CGAAGGGAGAAGGGTGTGAC(SEQ ID NO:2) Rb1基因探针:上游引物:TGCAGTATGCTTCCACCAGG(SEQ ID NO:3) 下游引物:TGTTGGTGTTGGCAGACCTT(SEQ ID NO:4) Chk2基因探针:上游引物:ATTTTGTCAGGGCCAACATACTG(SEQ ID NO:5) 下游引物:CCCATCGCCTCTTAGGTAAATTC(SEQ ID NO:6) P53基因探针:上游引物:GAACAGCTTTGAGGTGCGTG(SEQ ID NO:7) 下游引物:CTTCTTTGGCTGGGGAGAGG(SEQ ID NO:8) BRCA1基因探针:上游引物:TAGGGCTGGAAGCACAGAGT(SEQ ID NO:9) 下游引物:AATTTCCTCCCCAATGTTCC(SEQ ID NO:10)。 |
