突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖及其制备方法

摘要

本发明提供了一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖，由保藏号为CCTCC NO：M2011208的枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞经细胞破碎后，将破碎所得物质去除蛋白质、磷壁酸和脂类而得到。该突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的具体提取工艺为：1、细胞培养；2、离心；3、破碎细胞壁和乙醚抽提脂类物质；4、蛋白酶解。本发明同时还提供了枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖在快速直接处理pH2.5～7.0，温度4～80℃条件下的有机工业废水中的应用。本发明与现有技术相比，提取出的突变株ZN0871v11肽聚糖能直接快速高效处理有机污水，既大幅度增加了污水的可处理温度及可处理pH值范围，又减少了废水处理中的能源消耗以及缩短了工艺流程。

主权项

一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖的提取工艺，其特征在于将培养的枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11经细胞破碎后，将破碎所得物质去除蛋白质、磷壁酸和脂类而得到，具体包括以下步骤：(1)、菌种培养：将突变株ZN0871v11以1％的接种量接种到液体培养基中活化，然后将活化后的突变株ZN0871v11细胞转接到新鲜的液体培养基中培养30～36小时；(2)、离心：将步骤(1)中培养完成所得的菌液在10000～12000r/min，4～10℃环境下离心2～5分钟，弃上清收集沉淀得沉淀A，沉淀A加无菌水洗涤后离心收集沉淀得沉淀B；(3)、破碎细胞壁：在沉淀B中加入缓冲液A后微波加热至80℃以上后自然冷却，然后置于冰浴中用超声波破碎仪处理，直至其内无完整的细胞，然后在12000～13000r/min，4℃环境下离心10分钟，弃上清收集沉淀；再在沉淀中按0.1～1g沉淀/10mL乙醚的比例加入无水乙醚以抽提脂类物质，搅拌均匀后在室温下放置30～60min，然后在12000r/min，4～10℃条件下离心10分钟后收集沉淀，在收集到的沉淀中按每0.05～1g沉淀量加入10mL无水乙醇，然后在12000r/min，4～10℃条件下离心10分钟后收集沉淀，再在沉淀中按每0.05～1g沉淀量加入0.5～1mL蒸馏水使沉淀重悬并离心以洗出残留的乙醇，洗涤重复2次以上，最后一次洗涤后离心收集沉淀得沉淀C；(4)、蛋白酶解：在沉淀C中加入缓冲液B将细胞碎片沉淀重悬，除去细胞中DNA和RNA，然后按每毫升溶液中加入10～15μL浓度为10mg/mL蛋白酶溶液并混合均匀，再放置于恒温水浴中保温8小时以上；然后在12000～13000r/min，4℃条件下离心8～10分钟后弃上清收集沉淀，得沉淀D；将沉淀D用缓冲液C洗涤2～3次后，再在沉淀D中加入浓度为10％的TCA溶液，并将温度调节至20～37℃保温18～24h，最后将重悬后的液体在12000～13000r/min、4℃条件下离心8～10分钟后弃上清、收集沉淀，制得枯草芽孢杆菌突变株ZN0871v11细胞壁肽聚糖。