基于矿物油饱和PDMS材料的数字PCR芯片的制作方法

摘要

本发明拟涉及一种基于矿物油饱和PDMS材料数字PCR芯片的制备方法。其特征在于将一定量矿物油（液体石蜡）的PDMS单体制备PDMS数字PCR芯片，芯片包括乳滴生成结构、乳滴收集结构两部分。乳滴在同一芯片上制作、收集，然后在同一芯片上进行PCR扩增。该芯片避免了PDMS对数字PCR体系中油相的吞噬，有利于维持PCR反应过程中乳滴及PCR反应的稳定性。而且与目前数字PCR芯片技术相比，成本低，操作简便，应用前景非常广泛。

主权项

基于矿物油饱和PDMS材料的数字PCR芯片的制作方法，其特征在于包括芯片的制备、乳滴的生成以及PCR扩增，(1)芯片的制备包括模具的设计和制备，先制作微管道和进样槽，然后是PDMS材料的制备，PDMS材料制备是先用将一定量的矿物油混合均匀的PDMS单体和固化剂混合并浇注在模具上，在PDMS芯片交联固化过程中，矿物油自动的填充其中的空隙，最大限度的抑制制作好的PDMS芯片对数字PCR体系中油相的吞噬，维持PCR反应过程中乳滴及PCR反应的稳定性；每1ml PDMS中含100‑400μl矿物油，所述的矿物油为液体石蜡；(2)乳滴的生成微流控芯片乳滴的形成通过“十”字型或“T”字型两种芯片结构形式，通过调整油相及水相进样管道的尺寸、长度的不同，对所形成乳滴的尺寸或浓度进行调控；乳滴在同一芯片上制作、收集，然后在同一芯片上进行PCR扩增；(3)PCR扩增将进样完毕的芯片平放在具有原位PCR功能的PCR仪上进行扩增，扩增的变性温度与复性、扩增温度均与乳滴中所包裹PCR混合液的条件相同，但适当延长保温时间。