检测NK细胞活性的方法

摘要

本发明涉及检测NK细胞活性的方法。该方法为：利用转染技术使靶细胞特异性表达荧光蛋白，得到转染靶细胞；将待测NK细胞与转染靶细胞共孵育，得到第一混合细胞液；向第一混合细胞液中加入第一荧光染料，孵育，得到第二混合细胞液；向第二混合细胞液中加入第二荧光染料，混合，得到第三混合细胞液；利用流式细胞仪检测所述第三混合细胞液，得到活的、早期凋亡的、晚期凋亡的、以及死亡的靶细胞的细胞数比例；其中，第一荧光染料为荧光素标记的磷脂结合蛋白，第二荧光染料为核酸染料，并且荧光蛋白、第一荧光染料和第二荧光染料的发射波长互不相同。本发明的检测NK细胞活性的方法，可以更加全面地反映NK细胞的活性。

主权项

一种检测NK细胞活性的方法，其特征在于，包括下列步骤：利用转染技术使靶细胞特异性表达荧光蛋白，得到转染靶细胞；将待测NK细胞与所述转染靶细胞共孵育，得到第一混合细胞液；向所述第一混合细胞液中加入第一荧光染料，孵育，得到第二混合细胞液；向所述第二混合细胞液中加入第二荧光染料，混合，得到第三混合细胞液；利用流式细胞仪检测所述第三混合细胞液，得到活的靶细胞的细胞数比例，早期凋亡的靶细胞的细胞数比例，晚期凋亡的靶细胞的细胞数比例以及死亡的靶细胞的细胞数比例；其中，所述第一荧光染料为荧光素标记的磷脂结合蛋白，所述第二荧光染料为核酸染料，并且所述荧光蛋白、所述第一荧光染料和所述第二荧光染料的发射波长互不相同；所述第一荧光染料中，所述荧光素为以下中的一种：藻红蛋白、异硫氰酸荧光素、增强型荧光蛋白、别藻蓝蛋白；所述第二荧光染料为以下中的一种：7‑氨基放线菌素D、碘化丙啶、溴化乙锭、吖啶橙、4,6‑二脒基‑2‑苯基吲哚或赫克斯特；所述转染技术为：构建表达荧光蛋白的慢病毒质粒载体，并包装形成慢病毒；用所述慢病毒侵染靶细胞，将目的基因整合到靶细胞的基因组中。