一种快速评定植酸酶产品质量的方法

摘要

本发明涉及一种快速评定植酸酶产品质量的方法，是将粉碎后植物性原料样品中加入定量植酸酶产品，利用两步酶法(胃蛋白酶—胰酶)进行体外消化，取消化液进行磷含量的测定，通过消化液中磷含量的高低确定植酸酶产品酶解样品后释放的磷量，进而确定植酸酶产品的质量。本发明可以快速评定植酸酶产品质量且适于生产应用的方法，为生产中更好的使用植酸酶产品提供保障。

主权项

一种快速评定植酸酶产品质量的方法，包括以下步骤：1)将植物性饲料样品粉碎并过60目筛，每克植物性饲料样品中添加植酸酶产品0.5U，充分混匀；准确称取混匀后样品m1.0g，加入浓度为1.0mg/mL且pH＝1.5～3.5的胃蛋白酶水溶液10mL，密封，36～42℃水浴160～200r/min恒温振荡消化90min；再向上述消化90min后的样品中加入浓度为1.0mol/L NaOH溶液0.1mL中和；然后再向上述中和后的样品中加入浓度为2.5mg/mL胰酶水溶液10mL，混合均匀后转移到12000～14000D的透析袋中封口；将透析袋放入200ml pH＝7.6的Tris‑HcL缓冲液V中，36～42℃水浴160～200r/min恒温振荡消化2h；将2ml浓盐酸加入20ml消化2h小时后的消化液V₁中消煮，直至消化液澄清透明；澄清至透明的消化液放置至室温后调PH值至7.6后使用中速定量滤纸过滤，并以蒸馏水清洗中速定量滤纸两次，在合并后的滤液中加入10ml钒钼酸铵显色剂，用水定容至50ml，摇匀得到试样溶液；试样溶液室温放置10min后，用1cm光径比色皿在400nm波长下测定试样溶液的吸光度，在下述绘制的工作曲线中查得试样溶液的磷含量m₁；2)工作曲线的绘制：分别配制六种磷含量为0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml的磷标准应用液，室温放置10min后，用1cm光径比色皿在400nm波长下测定上述六种磷标准应用液的吸光度值；以上述六种磷含量为横坐标，以六种磷含量分别对应的吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线；3)将样品重量m及从工作曲线中查得的试样溶液磷含量m₁等代入下述公式，计算磷含量：$P(\%)=\frac{m_1\times V}{m\times V_1\times {10}^6}\times 100$其中，P为磷含量，％；m为称取样品重量，g；m₁为由工作曲线中查得试样溶液磷含量，μg；V为试样透析消化液的总体积，V＝200ml；V₁为测定时移取试样透析消化液的体积，V₁＝20ml。