一种鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法

摘要

本发明提供了一种鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，它主要包括配置组织匀浆、测定蛋白质含量、在孵育夜中孵育、终止反应并计算含量几步。本发明的测定方法样品处理过程简单，只需在加入还原剂DTT的PBS缓冲液中匀浆即可，操作过程也比较简便，实验仪器仅需要高速冷冻离心机，紫外分光光度计，水浴锅和γ放射免疫计数仪即可。碘125标记物可在生物技术研究所定制合成，其半衰期较长，有利于实验的开展，测定结果可靠，具有很强的实用性。

主权项

一种鱼类组织中三种脱碘酶活性的测定方法，其步骤包括：(1)称取动物组织后用缓冲液将动物组织配制成质量浓度为1‑5％的匀浆，并离心取上清夜；(2)测定所述上清液中蛋白质含量；(3)将所述上清液按照体积比1：1加入孵育液在37℃下孵育120min；将缓冲液按照同样方法加入孵育液后在37℃下孵育120min作为对照组；测定Ⅰ型脱碘酶活性的孵育液为50000cpm¹²⁵I‑rT₃，0.1μM rT₃，15mM DTT混合物；测定Ⅱ型脱碘酶的孵育液为50000cpm¹²⁵I‑T₄，1nM T₄，30mMDTT混合物；测定Ⅲ型脱碘酶的孵育液为150000cpm¹²⁵I‑T₃，1nM T₃，30mM DTT混合物；(4)加入BSA溶液终止反应后沉淀离心，取上清液用放射免疫计数仪分别测定总放射性及上清液的放射性cpm值，依据下述经验公式分别计算动物组织中三种脱碘酶活性：其中：其中SCc＝SC－BC；BC：对照管的放射性计数；SC：样品管的放射性计数；SA：孵育液中反应底物的含量/TC；TC：总放射性计数。