一种多顺反子双标表达慢病毒载体构建及应用

摘要

本发明公开了一种慢病毒载体，其是将FUGW中原有的hUbc启动子替换为U6启动子或强启动子EF1α，并将原有的EGFP基因替换为强荧光蛋白copGFP或Tomato基因，并在该基因的同一顺反子上连接真核抗性标记基因以及多克隆位点和标签蛋白Flag，并采用剪切蛋白T2A和P2A连接该同一顺反子上的多个基因。本发明的慢病毒载体较现有常规慢病毒载体具有更多的优势。如同一顺反子同时高效表达表达多个蛋白；荧光强度高；可对已干扰的基因进行诱导性功能回复；适用于大片段基因的承载等。本项发明的慢病毒载体适用更广泛，效率更高，更加有利于慢病毒载体在临床及科学研究中的应用，具有良好的实用价值和应用前景。

主权项

一种慢病毒载体，其是以慢病毒载体FUGW为出发载体进行改进，其特征在于，所述的慢病毒载体为将慢病毒载体FUGW的Pac I和EcoR I酶切位点之间包含hUbC启动子和EGFP的片段置换为U6‑EF1α‑MCS‑FLAG‑P2A‑Tomato‑T2A‑Puromycin片段而得的慢病毒载体；或者，所述的慢病毒载体为将慢病毒载体FUGW的Pac I和EcoR I酶切位点之间包含hUbC Promoter和EGFP的片段置换为U6‑EF1α‑MCS‑FLAG‑P2A‑copGFP‑T2A‑Hygromycin片段而得的慢病毒载体，所述的U6‑EF1α‑MCS‑FLAG‑P2A‑Tomato‑T2A‑Puromycin片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；所述的U6‑EF1α‑MCS‑FLAG‑P2A‑copGFP‑T2A‑Hygromycin片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。