一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法

摘要

本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P₁）为母本、‘南农银山’为父本（P₂）杂交获得的92株F₁分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。

主权项

一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，其特征在于包括以下步骤：a、试验材料及其表型数据的获得:第一年选择分枝性状差异明显的两个菊花品种‘QX‑145’为母本、‘南农银山’为父本进行人工杂交，获得F₁ 杂交种子，次年3月初经穴盘点播，连同亲本扦插苗于4月中下旬单株标号后定植，常规管理同大田，分别于第二年和第三年秋季初花期调查亲本和F₁群体植株的分枝性状，单株重复3次，并计算两年性状调查的平均值，利用Microsoft Excel 2003软件和SPSS 15.0 软件对分枝性状在两个年份的表型数据分别进行基本描述性统计分析；b、菊花连锁图谱构建：1）采用CTAB微量法提取亲本及其F₁杂交后代基因组DNA；2）利用杂交亲本对SRAP和SSR引物组合进行多态性筛选，将筛选出的多态性引物组合用于作图群体的多态性扩增并统计扩增后的多态性条带数据；3）运用JoinMap4.0 软件，选用‘CP作图模型’设置 LOD为 4.0，分别对双亲的分离位点进行连锁分析，获得双亲的分子标记连锁群，再用Mapchart2.2 软件绘制连锁图；c 、菊花分枝性状的QTL定位：结合表型数据和分子遗传图谱，运用 Win QTL Cartographer v2.5软件及复合区间作图法进行菊花分枝性状的QTL分析，并估算遗传参数，所述的遗传参数包含各QTL的加性效应及其对表型变异的贡献率；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定：根据步骤c所得的主效QTL所在的标记区间即可确定与菊花分枝性状紧密关联的分子标记：与一级分枝数紧密关联的分子标记为PbnE1N4，其对应的引物对为SSR338和SSR63，引物对SSR338序列为：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，引物对SSR63序列为：SEQ ID NO.3和 SEQ ID NO.4；同一级分枝数，分枝高度关联分子标记为Bh E1N11，其对应的引物对为SSR185和Me3Em15，引物对SSR185序列为：SEQ ID NO.5和 SEQ ID NO.6，引物对Me3Em15序列为：SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；与一级分枝长度关联的分子标记为PblE1N15，其对应的引物对为SSR341、Me4Em3、Me3Em8、 Me20Em4和Me21Em5中的任意一对，引物对SSR341 序列为SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10，引物对Me4Em3序列为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12，引物对Me3Em8序列为SEQ ID NO.7和 SEQ ID NO.13，引物对 Me20Em4序列为SEQ ID NO.14和 SEQ ID NO.15，引物对Me21Em5序列为SEQ ID NO.16和 SEQ ID NO.17。