一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法

摘要

一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法，该方法包括外植体培养、外植体处理、不定芽诱导、不定芽继代增殖、不定芽生根、整床及基质配制、驯化移栽方法。本发明用自配的营养液对白木乌桕枝条进行水培复幼，可获得新的嫩枝作为外植体，并通过磁力搅拌的消毒方法，可将外植体污染率控制在5%以内，较常规处理方法降低了15%。本发明一种白木乌桕嫩枝茎段快速诱导植株的方法生产周期短，出苗迅速整齐，生产成本低，操作流程简单，白木乌桕外植体污染率低于5%，不定芽诱导率达85%以上，增殖系数达8.0，玻璃化率降低5.5%，不定芽生根率达95%，移栽成活率达90%以上，能有效满足白木乌桕大规模生产的需求，有利于推广白木乌桕种植产业。

主权项

一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法，包括外植体培养、外植体处理、不定芽诱导、不定芽继代增殖、不定芽生根、整床及基质配制、驯化移栽方法，其特征在于，所述方法的步骤为：（1）2月中上旬，在树液开始流动，但芽尚未萌动时，在苗圃地里选取2～4年生的白木乌桕优良母株，剪取健康枝条，用流水冲洗干净后，在白天培养温度（27±2）℃、夜间培养温度（23±2）℃，光照强度2000 Lx，光照12 h/d的培养室进行营养液水培复幼；每3天更换一次营养液，约15天后用新长出的嫩枝作为外植体；（2）将步骤（1）的嫩枝先剪去新叶，保留叶柄0.1～0.2 mm，再剪成5～8 cm茎段，放入流水中冲洗30 min；在无菌条件下，用0.1% HgCl₂磁力搅拌5 min，无菌水磁力搅拌5次，每次2 min；然后将消毒后的茎段再切割成1～2 cm带1个腋芽的茎段作为接种外植体，其中接种外植体形态学上端为平切，下端为45度斜切；（3）将接种外植体垂直插入诱导分化培养基WPM + 6‑BA 1.2 mg/L + NAA 0.15 mg/L + 硝酸银2.0 mg/L，培养基内加白糖4.5%以及0.7%琼脂，pH为5.8；接种后先暗培养5天，然后转入光照培养25～30天，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间13小时，光强为2000～2500 Lx，产生不定芽；（4）将产生的不定芽切下后转接到增殖与继代培养基WPM + 6‑BA 1.2 mg/L + KT 0.25 mg/L + GA₃ 0.5 mg/L，使用透气封口膜封口，培养基内添加白糖5.5%以及0.75%琼脂，pH为5.8，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间13小时，光强为2000～2500 Lx，培养30～35 天，增殖出原来6～8倍的不定芽；（5）把转接后获得的大于2 cm高的不定芽切下转至生根培养基½MS + NAA 0.8 mg/L + IBA 0.2 mg/L + Critric acid 80 mg/L，培养基内添加白糖5.5%以及0.75%琼脂，pH为5.8，此期间内培养室温度需为（25±2）℃，每天光照时间15小时，光强为4000～5000 Lx，得到生根苗；（6）移栽基质配制方法是将移栽床面整平踏实后，床宽80 cm，沟面宽30 cm，深10 cm，用3%的硫酸亚铁溶液喷洒后，将口径为6 cm、高度10 cm的有底蜂窝育苗容器铺在床面上，装入混合基质；（7）将生根苗先在室温中度过7天，再打开瓶盖度过3天后，冲洗干净根部培养基；放入0.02 mg/L NAA溶液中浸泡1 min后，移栽入混合基质中；采用沟焖灌，水深超过沟面至1.5 cm以内，并用竹片拱支透光率为45%的遮阳网遮盖20天，获得健康植株。