适于转基因检测的大豆干叶子中高质量DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种适于转基因检测的大豆干叶子中高质量DNA的提取方法，所提取基因组DNA条带清晰，纯度高，杂质含量少，满足转基因检测所需的PCR、酶切、分子克隆、测序等分子生物学实验的需要。步骤如下：1）将大豆干叶子用Buffer I浸泡，并于40～60℃温度加热后剪碎成沫状；2）加入Buffer II，摇匀，离心，弃上清，重复至上清液澄清，取沉淀；3）加入CTAB提取液、质量浓度3%的β-巯基乙醇和蛋白酶K，55℃～65℃加热40～60分钟；4）加入等体积的酚、氯仿和异戊醇混合液，混匀，离心，取上清；5）加入等体积的氯仿和异戊醇混合液，混匀，离心，取上清；6）加入0.8倍体积预冷的异丙醇，于-20℃静置10～30分钟，离心，弃上清，洗涤，晾干，TE缓冲液溶解即得。

主权项

一种适于转基因检测的大豆干叶子中高质量DNA的提取方法，其特征在于，步骤如下：1)取0.04g大豆干叶子，放入1.5mL的离心管中，加入200μL Buffer I，浸泡5～15分钟，40～60℃水浴加热，把浸软的叶子剪碎；2)加入1.2mL Buffer II，上下颠倒混匀5分钟，10000r/min离心5分钟，弃上清，重复此步骤2～3次，至上清液澄清为止；3)往步骤2)所得沉淀中加入600μL CTAB提取液、最终质量浓度3％的β‑巯基乙醇和2μL蛋白酶K，摇匀，55℃～65℃水浴加热40～60分钟，每隔10分钟上下颠倒摇匀，得混合液；4)往步骤3)所得混合液中，加入与其等体积的酚、氯仿和异戊醇混合液，混匀，离心，取上清；5)往步骤4)所得上清中，加入与其等体积的氯仿和异戊醇混合液，混匀，离心，取上清；6)往步骤5)所得上清中，加入上清0.8倍体积预冷的异丙醇，于‑20℃静置10～30分钟，离心，弃上清，洗涤，晾干，TE缓冲液溶解即得；其中，所述Buffer I的成分为：0.2mol/L Tris‑HCl，0.05mol/L EDTA，1mol/LNaCl，pH值为8.0；所述Buffer II的成分为：无菌水与β‑巯基乙醇，两者质量比为40:1；所述CTAB提取液含质量浓度2％的聚乙烯吡咯烷酮、1.4mol/L NaCl；所述酚、氯仿和异戊醇混合液中三者的体积比为25：24：1；所述氯仿和异戊醇混合液中两者的体积比为24：1；所述TE缓冲液的成分为：10mmol/L Tris‑HCl、1mmol/L EDTA，pH值为8.0。